| 摘要 | 第4-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩写词 | 第14-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 研究背景和意义 | 第15-16页 |
| 1.2 国内外的研究现状及发展动态分析 | 第16-25页 |
| 1.2.1 DR的临床诊断 | 第16页 |
| 1.2.2 DR的发病机制的研究 | 第16-18页 |
| 1.2.3 VEGF在DR发生发展中的作用 | 第18-21页 |
| 1.2.4 Robo4在DR发生发展中的作用 | 第21-23页 |
| 1.2.5 VEGF与Robo4的相互作用 | 第23-24页 |
| 1.2.6 miRNA对DR发展的调控 | 第24-25页 |
| 1.3 展望和研究意义 | 第25-27页 |
| 第2章 VEGF和Robo4在PDR患者纤维血管膜中的表达及共定位研究 | 第27-39页 |
| 2.1 材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 人体组织 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.3 配制的溶液 | 第28-29页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-31页 |
| 2.2.1 实验病例标本 | 第29页 |
| 2.2.2 石蜡切片HE染色 | 第29-30页 |
| 2.2.3 CD34标记纤维血管膜中的血管 | 第30页 |
| 2.2.4 纤维血管膜中VEGF和Robo4的免疫荧光染色共聚焦 | 第30-31页 |
| 2.2.5 纤维血管膜中VEGF与CD34的免疫荧光染色共聚焦 | 第31页 |
| 2.2.6 纤维血管膜中Robo4与CD34的免疫荧光染色共聚焦 | 第31页 |
| 2.3 结果 | 第31-34页 |
| 2.3.1 PDR患者增殖膜的HE染色 | 第31-32页 |
| 2.3.2 CD34和Robo4在纤维血管膜中的免疫荧光共定位 | 第32-33页 |
| 2.3.3 CD34和VEGF在纤维血管膜中的免疫荧光共定位 | 第33页 |
| 2.3.4 VEGF和Robo4在纤维血管膜中的免疫荧光共定位 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-37页 |
| 小结 | 第37-39页 |
| 第3章 人视网膜内皮细胞和人视网膜色素上皮细胞中VEGF与Robo4的表达 | 第39-57页 |
| 3.1 材料 | 第39-44页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.3 溶液的配制 | 第40-44页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-50页 |
| 3.2.1 HREC/RPE的常规培养 | 第44-45页 |
| 3.2.2 细胞计数法 | 第45页 |
| 3.2.3 HREC/RPE的高糖培养 | 第45-46页 |
| 3.2.4 实时荧光定量PCR检测各组细胞中VEGF与Robo4的miRNA表达 | 第46-48页 |
| 3.2.5 WesternBlot检测各组细胞中VEGF和Robo4的蛋白表达 | 第48-49页 |
| 3.2.6 数据分析 | 第49-50页 |
| 3.3 实验结果 | 第50-53页 |
| 3.3.1 高糖条件下HREC中VEGF和Robo4miRNA表达变化 | 第50页 |
| 3.3.2 高糖条件下HRPE中VEGF和Robo4miRNA的表达变化 | 第50-51页 |
| 3.3.3 建立蛋白浓度测定标准曲线 | 第51-52页 |
| 3.3.4 高糖条件下HREC中VEGF和Robo4蛋白的表达水平 | 第52-53页 |
| 3.3.5 高糖条件下HRPE中VEGF和Robo4蛋白的表达 | 第53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-55页 |
| 小结 | 第55-57页 |
| 第4章 VEGF和Robo4在糖尿病大鼠动物模型中的表达 | 第57-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第57-59页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第57页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第57-58页 |
| 4.1.3 溶液的配制 | 第58页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第58-59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-60页 |
| 4.2.1 建立STZ诱导的糖尿病大鼠模型 | 第59页 |
| 4.2.2 提取视网膜全蛋白 | 第59-60页 |
| 4.2.3 Western-Blot测定糖尿病大鼠视网膜VEGF和Robo4蛋白表达情况 | 第60页 |
| 4.2.4 数据分析 | 第60页 |
| 4.3 实验结果 | 第60-63页 |
| 4.3.1 成功构建糖尿病大鼠模型 | 第60-61页 |
| 4.3.2 建立蛋白浓度测定标准曲线 | 第61页 |
| 4.3.3 糖尿病大鼠视网膜中VEGF表达情况 | 第61-62页 |
| 4.3.4 糖尿病大鼠视网膜中Robo4表达情况 | 第62-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-64页 |
| 小结 | 第64-65页 |
| 第5章 筛选与VEGF和Robo4共同作用的miRNA | 第65-75页 |
| 5.1 材料 | 第65-69页 |
| 5.1.1 细胞株 | 第65页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第65-66页 |
| 5.1.3 溶液的配制 | 第66-68页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第68-69页 |
| 5.2 实验方法 | 第69-70页 |
| 5.2.1 HREC/RPE的常规培养(细胞培养方法如3.2) | 第69页 |
| 5.2.2 HREC/RPE的高糖培养(细胞培养方法如3.3) | 第69页 |
| 5.2.3 实时荧光定量PCR检测各组细胞中miRNA的表达 | 第69-70页 |
| 5.2.4 miRNA-15家族与VEGF和Robo4关系的预测 | 第70页 |
| 5.2.5 数据分析 | 第70页 |
| 5.3 实验结果 | 第70-72页 |
| 5.3.1 高糖条件下HREC中miRNA-15家族的表达 | 第70-71页 |
| 5.3.2 高糖条件下HRPE中miRNA-15家族的表达 | 第71-72页 |
| 5.3.3 筛选同时作用于VEGF和Robo4的miRNA | 第72页 |
| 5.4 讨论 | 第72-74页 |
| 小结 | 第74-75页 |
| 第6章 miRNA-15对VEGF和Robo4的表达调控 | 第75-85页 |
| 6.1 实验材料 | 第75-77页 |
| 6.1.1 实验动物 | 第75页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第75-76页 |
| 6.1.3 溶液的配制 | 第76-77页 |
| 6.1.4 实验仪器 | 第77页 |
| 6.2 实验方法 | 第77-79页 |
| 6.2.1 验证miRNA-15与靶基因的相互作用 | 第77-78页 |
| 6.2.2 STZ 诱导糖尿病大鼠模型的建立，mi RNA-15a agomir 玻璃体显微注射 | 第78页 |
| 6.2.3 miRNA-15a表达测定 | 第78页 |
| 6.2.4 提取视网膜全蛋白 | 第78页 |
| 6.2.5 Western-Blot测定糖尿病大鼠视网膜VEGF和Robo4蛋白表达情况 | 第78页 |
| 6.2.6 数据分析 | 第78-79页 |
| 6.3 实验结果 | 第79-82页 |
| 6.3.1 miRNA-15a agomir提高视网膜miRNA-15a表达水平 | 第79页 |
| 6.3.2 建立蛋白浓度测定标准曲线 | 第79-81页 |
| 6.3.3 miRNA-15a agomir调节视网膜中VEGF表达水平下降 | 第81页 |
| 6.3.4 miRNA-15a agomir调节视网膜Robo4表达水平下降 | 第81-82页 |
| 6.4 讨论 | 第82-83页 |
| 小结 | 第83-85页 |
| 第7章 结论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
