中文摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-7页 |
1 引言 | 第10-16页 |
1.1 粘虫的研究现状 | 第10-11页 |
1.2 昆虫免疫防御系统 | 第11-12页 |
1.3 RNAi技术在昆虫中的研究现状 | 第12-13页 |
1.4 102基因的研究现状 | 第13-14页 |
1.5 本实验目的意义 | 第14-15页 |
1.6 研究内容及技术路线 | 第15-16页 |
1.6.1 研究内容 | 第15页 |
1.6.2 技术路线 | 第15-16页 |
2 材料与方法 | 第16-30页 |
2.1 试验材料 | 第16-18页 |
2.1.1 供试昆虫 | 第16页 |
2.1.2 菌株与质粒 | 第16页 |
2.1.3 主要试剂 | 第16-17页 |
2.1.4 主要仪器 | 第17页 |
2.1.5 主要溶液与培养基的配制 | 第17-18页 |
2.2 试验方法 | 第18-23页 |
2.2.1 取样 | 第18-19页 |
2.2.2 总RNA的提取 | 第19-20页 |
2.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第20-21页 |
2.2.4 引物设计与合成 | 第21页 |
2.2.5 ORF序列的克隆及纯化 | 第21-22页 |
2.2.6 102基因的连接转化 | 第22-23页 |
2.3 102基因的序列分析及进化树的构建 | 第23页 |
2.4 粘虫102基因的时空表达规律 | 第23-24页 |
2.4.1 引物的设计及筛选 | 第23页 |
2.4.2 102基因和内参基因标准曲线的制备 | 第23页 |
2.4.3 不同龄期阶段虫体的表达量 | 第23-24页 |
2.4.4 不同组织中102基因的表达量 | 第24页 |
2.4.5 荧光实时定量PCR反应 | 第24页 |
2.5 环境胁迫对粘虫102基因表达量的影响 | 第24-25页 |
2.5.1 幼虫密度对102基因表达的影响 | 第24页 |
2.5.2 金龟子绿僵菌侵染对102基因表达的影响 | 第24-25页 |
2.5.3 伞裙追寄蝇寄生对102基因表达的影响 | 第25页 |
2.6 粘虫102基因的功能鉴定 | 第25-28页 |
2.6.1 RNAi处理对102基因表达的影响 | 第25-26页 |
2.6.2 RNAi处理对粘虫免疫相关生理指标的影响 | 第26-27页 |
2.6.3 RNAi处理对粘虫飞行及生殖能力的影响 | 第27-28页 |
2.7 数据处理与分析 | 第28-30页 |
3 结果与分析 | 第30-54页 |
3.1 总RNA的提取 | 第30页 |
3.2 102基因的克隆及序列分析 | 第30-32页 |
3.3 102基因蛋白结构分析与系统进化树的构建 | 第32-35页 |
3.4 102基因的时空表达差异 | 第35-38页 |
3.4.1 定量引物试验结果 | 第35-36页 |
3.4.2 102基因脂肪体在不同发育阶段的相对表达量 | 第36-37页 |
3.4.3 粘虫102基因在各个发育阶段的不同的组织表达 | 第37-38页 |
3.5 环境胁迫对粘虫102基因表达量的影响结果 | 第38-46页 |
3.5.1 幼虫密度对102基因表达的影响 | 第38-42页 |
3.5.2 伞裙追寄蝇寄生对粘虫102基因的影响 | 第42-43页 |
3.5.3 绿僵菌侵染对粘虫102基因的影响 | 第43-46页 |
3.6 粘虫102基因功能鉴定 | 第46-54页 |
3.6.1 102基因RNAi沉默片段的筛选 | 第46页 |
3.6.2 102基因RNAi沉默后粘虫免疫活性的测定 | 第46-50页 |
3.6.3 RNAi处理后,粘虫飞行及生殖能力的测定 | 第50-54页 |
4 讨论 | 第54-58页 |
5 结论 | 第58-60页 |
参考文献 | 第60-64页 |
在学期间研究成果 | 第64-66页 |
致谢 | 第66页 |