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粘虫102基因的克隆、表达及功能鉴定

中文摘要第3-5页
ABSTRACT第5-7页
1 引言第10-16页
    1.1 粘虫的研究现状第10-11页
    1.2 昆虫免疫防御系统第11-12页
    1.3 RNAi技术在昆虫中的研究现状第12-13页
    1.4 102基因的研究现状第13-14页
    1.5 本实验目的意义第14-15页
    1.6 研究内容及技术路线第15-16页
        1.6.1 研究内容第15页
        1.6.2 技术路线第15-16页
2 材料与方法第16-30页
    2.1 试验材料第16-18页
        2.1.1 供试昆虫第16页
        2.1.2 菌株与质粒第16页
        2.1.3 主要试剂第16-17页
        2.1.4 主要仪器第17页
        2.1.5 主要溶液与培养基的配制第17-18页
    2.2 试验方法第18-23页
        2.2.1 取样第18-19页
        2.2.2 总RNA的提取第19-20页
        2.2.3 cDNA第一条链的合成第20-21页
        2.2.4 引物设计与合成第21页
        2.2.5 ORF序列的克隆及纯化第21-22页
        2.2.6 102基因的连接转化第22-23页
    2.3 102基因的序列分析及进化树的构建第23页
    2.4 粘虫102基因的时空表达规律第23-24页
        2.4.1 引物的设计及筛选第23页
        2.4.2 102基因和内参基因标准曲线的制备第23页
        2.4.3 不同龄期阶段虫体的表达量第23-24页
        2.4.4 不同组织中102基因的表达量第24页
        2.4.5 荧光实时定量PCR反应第24页
    2.5 环境胁迫对粘虫102基因表达量的影响第24-25页
        2.5.1 幼虫密度对102基因表达的影响第24页
        2.5.2 金龟子绿僵菌侵染对102基因表达的影响第24-25页
        2.5.3 伞裙追寄蝇寄生对102基因表达的影响第25页
    2.6 粘虫102基因的功能鉴定第25-28页
        2.6.1 RNAi处理对102基因表达的影响第25-26页
        2.6.2 RNAi处理对粘虫免疫相关生理指标的影响第26-27页
        2.6.3 RNAi处理对粘虫飞行及生殖能力的影响第27-28页
    2.7 数据处理与分析第28-30页
3 结果与分析第30-54页
    3.1 总RNA的提取第30页
    3.2 102基因的克隆及序列分析第30-32页
    3.3 102基因蛋白结构分析与系统进化树的构建第32-35页
    3.4 102基因的时空表达差异第35-38页
        3.4.1 定量引物试验结果第35-36页
        3.4.2 102基因脂肪体在不同发育阶段的相对表达量第36-37页
        3.4.3 粘虫102基因在各个发育阶段的不同的组织表达第37-38页
    3.5 环境胁迫对粘虫102基因表达量的影响结果第38-46页
        3.5.1 幼虫密度对102基因表达的影响第38-42页
        3.5.2 伞裙追寄蝇寄生对粘虫102基因的影响第42-43页
        3.5.3 绿僵菌侵染对粘虫102基因的影响第43-46页
    3.6 粘虫102基因功能鉴定第46-54页
        3.6.1 102基因RNAi沉默片段的筛选第46页
        3.6.2 102基因RNAi沉默后粘虫免疫活性的测定第46-50页
        3.6.3 RNAi处理后,粘虫飞行及生殖能力的测定第50-54页
4 讨论第54-58页
5 结论第58-60页
参考文献第60-64页
在学期间研究成果第64-66页
致谢第66页

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