| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第10-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-21页 |
| 1.1 表观遗传学简介 | 第14-15页 |
| 1.2 人类辅助生殖技术简况 | 第15-17页 |
| 1.3 印记基因DNA甲基化状态 | 第17-20页 |
| 1.4 ART技术与表观遗传改变的关系 | 第20页 |
| 1.5 立题背景及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 印记基因H19在不同质量精子和胚胎中甲基化状态研究 | 第21-50页 |
| 2.1 印记基因H19概况 | 第21-24页 |
| 2.2 主要试剂及配置 | 第24-25页 |
| 2.2.1 试剂 | 第24页 |
| 2.2.2 溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.3 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.4 样本收集 | 第26-27页 |
| 2.5 研究方法及步骤 | 第27-35页 |
| 2.5.1 精子的优化 | 第27页 |
| 2.5.2 睾丸、附睾精子的收集 | 第27-28页 |
| 2.5.3 精子样本和淋巴细胞DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.5.4 D3期胚胎的收集与处理 | 第29页 |
| 2.5.5 DNA亚硫酸氢盐修饰 | 第29-31页 |
| 2.5.6 PCR扩增印记基因H19片段 | 第31-35页 |
| 2.6 PCR产物电泳检测 | 第35-36页 |
| 2.7 PCR产物纯化 | 第36页 |
| 2.8 PCR产物的克隆测序(BSP) | 第36-38页 |
| 2.8.1 PCR产物与载体连接 | 第36-37页 |
| 2.8.2 单克隆测序 | 第37-38页 |
| 2.9 统计学分析 | 第38页 |
| 2.10 BSP测序结果甲基化状态分析图 | 第38-42页 |
| 2.11 研究结果 | 第42-44页 |
| 2.11.1 不同质量精子组H19基因甲基化状态 | 第42-43页 |
| 2.11.2 单个胚胎Bisulfite-PCR扩增结果 | 第43-44页 |
| 2.11.3 胚胎中不同的印记基因甲基化状态检测结果 | 第44页 |
| 2.12 讨论 | 第44-49页 |
| 2.12.1 不同质量精子印记基因具有不同的甲基化状态 | 第44-46页 |
| 2.12.2 不同胚胎印记基因具有不同的甲基化状态 | 第46-48页 |
| 2.12.3 不同的受精方式与甲基化异常的关系 | 第48-49页 |
| 2.13 小结 | 第49-50页 |
| 第三章 印记基因PEG1在不同质量精子和胚胎中甲基化状态研究 | 第50-74页 |
| 3.1 印记基因PEG1概况 | 第50-52页 |
| 3.2 主要试剂及配置 | 第52-53页 |
| 3.2.1 试剂 | 第52页 |
| 3.2.2 溶液配制 | 第52-53页 |
| 3.3 主要仪器 | 第53-54页 |
| 3.4 样本收集 | 第54-55页 |
| 3.5 研究方法及步骤 | 第55-62页 |
| 3.5.1 精子的优化 | 第55页 |
| 3.5.2 睾丸、附睾精子的收集 | 第55-56页 |
| 3.5.3 精子样本和淋巴细胞DNA的提取 | 第56页 |
| 3.5.4 D3期胚胎的收集与处理 | 第56页 |
| 3.5.5 DNA亚硫酸氢盐修饰 | 第56-58页 |
| 3.5.6 PCR扩增印记基因PEG1片段 | 第58-62页 |
| 3.6 PCR产物电泳检测 | 第62页 |
| 3.7 PCR产物纯化 | 第62页 |
| 3.8 PCR产物的克隆测序(BSP) | 第62-64页 |
| 3.8.1 PCR产物与载体连接 | 第63页 |
| 3.8.2 单克隆测序 | 第63-64页 |
| 3.9 统计学分析 | 第64页 |
| 3.10 BSP测序结果甲基化状态分析图 | 第64-68页 |
| 3.11 研究结果 | 第68-70页 |
| 3.11.1 不同质量精子参数组PEG1甲基化状态 | 第68-69页 |
| 3.11.2 单个胚胎Bisulfite-PCR扩增结果 | 第69-70页 |
| 3.11.3 胚胎不同的印记基因甲基化状态检测结果 | 第70页 |
| 3.12 讨论 | 第70-72页 |
| 3.12.1 不同质量精子印记基因具有不同的甲基化状态 | 第70-71页 |
| 3.12.2 不同胚胎印记基因具有不同的甲基化状态 | 第71-72页 |
| 3.12.3 不同的受精方式与甲基化异常的关系 | 第72页 |
| 3.13 小结 | 第72-74页 |
| 第四章 总论与展望 | 第74-77页 |
| 4.1 总结 | 第74-75页 |
| 4.2 展望 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 附录A:攻读硕士期间论文发表情况 | 第85-86页 |
| 附录B:捐赠样本信息 | 第86页 |
