| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-21页 |
| 1.1 长链非编码RNA的简介 | 第14-15页 |
| 1.1.1 长链非编码RNA的概述 | 第14页 |
| 1.1.2 长链非编码RNA的生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.2 胃癌的简介 | 第15页 |
| 1.2.1 胃癌的概述 | 第15页 |
| 1.2.2 LNCRNAS在胃癌中的作用研究 | 第15页 |
| 1.2.3 LNCRNAS在胃癌中的临床价值 | 第15页 |
| 1.3 EMT的简介 | 第15-18页 |
| 1.3.1 EMT的概念 | 第16页 |
| 1.3.2 EMT的发生机制 | 第16-17页 |
| 1.3.3 EMT与肿瘤侵袭和转移 | 第17-18页 |
| 1.4 LINC00473的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.4.1 LINC00473研究基础 | 第18-19页 |
| 1.4.2 LINC00473在肿瘤疾病中的研究进展 | 第19-21页 |
| 第二章 实验研究的目的、方法、实验设计方案和意义 | 第21-25页 |
| 2.1 实验研究目的 | 第21页 |
| 2.2 实验研究方法 | 第21-22页 |
| 2.3 实验研究方法 | 第22-23页 |
| 2.4 实验方案设计 | 第23-24页 |
| 2.5 研究意义 | 第24-25页 |
| 第三章 LINC00473在正常胃粘膜细胞与胃癌细胞系、人非癌症胃组织与胃癌组织中表达水平检测及分析 | 第25-34页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第25-28页 |
| 3.1.1 病例来源及标本采集 | 第25页 |
| 3.1.1.1 标本采集 | 第25页 |
| 3.1.2 细胞株 | 第25-26页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第26页 |
| 3.1.4 主要溶液配置 | 第26-27页 |
| 3.1.5 主要仪器、耗材 | 第27-28页 |
| 3.2 方法 | 第28-31页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第28页 |
| 3.2.2 细胞与胃癌标本总RNA的提取 | 第28-30页 |
| 3.2.3 RNA逆转录 | 第30页 |
| 3.2.4 荧光定量PCR | 第30-31页 |
| 3.2.5 统计分析 | 第31页 |
| 3.3 结论 | 第31-33页 |
| 3.3.1 LINC00473在胃癌细胞株中的表达情况 | 第31-32页 |
| 3.3.2 LINC00473在非癌症胃组织以及胃癌组织中的表达情况 | 第32-33页 |
| 3.4 讨论 | 第33-34页 |
| 第四章 RNAI抑制LINC00473表达对胃癌细胞转移、增殖及凋亡的影响 | 第34-50页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第34-37页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第34-35页 |
| 4.1.2 试验用试剂及溶液 | 第35-37页 |
| 4.1.3 主要仪器、耗材 | 第37页 |
| 4.2 方法 | 第37-42页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第37页 |
| 4.2.2 提取细胞当中总RNA | 第37页 |
| 4.2.3 RNA逆转录 | 第37-38页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR | 第38页 |
| 4.2.5 细胞总蛋白的提取 | 第38页 |
| 4.2.6 WESTERNBLOT | 第38-39页 |
| 4.2.7 LINC00473SIRNA瞬时转染 | 第39-40页 |
| 4.2.8 TRANSWELL迁移实验 | 第40-41页 |
| 4.2.9 平板克隆形成实验 | 第41页 |
| 4.2.10 CCK-8细胞增殖实验 | 第41-42页 |
| 4.2.11 细胞凋亡检测 | 第42页 |
| 4.2.12 统计分析 | 第42页 |
| 4.3 结果 | 第42-48页 |
| 4.3.1 LINC00473干扰效率的验证 | 第42-43页 |
| 4.3.2 LINC00473干扰促进SGC-7901、HGC-27细胞的增殖 | 第43-45页 |
| 4.3.3 LINC00473干扰促进SGC-7901、HGC-27细胞的迁移能力 | 第45-46页 |
| 4.3.4 LINC00473抑制EMT的发生 | 第46-47页 |
| 4.3.5 LINC00473对胃癌细胞凋亡的影响 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 体外上调LINC00473表达对胃癌细胞转移和增殖的影响 | 第50-63页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第50-52页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第50-51页 |
| 5.1.2 主要溶液配制 | 第51-52页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 5.2 方法 | 第52-56页 |
| 5.2.1 细胞培养 | 第52页 |
| 5.2.2 提取细胞当中的总RNA | 第52页 |
| 5.2.3 RNA逆转录 | 第52页 |
| 5.2.4 构建LINC00473过表达质粒 | 第52-56页 |
| 5.2.4.1 PCR扩增目的片段 | 第52-53页 |
| 5.2.4.2 T-A克隆 | 第53-54页 |
| 5.2.4.3 质粒提取 | 第54-55页 |
| 5.2.4.4 T-4连接 | 第55页 |
| 5.2.4.5 过表达质粒的鉴定及提取 | 第55-56页 |
| 5.2.5 过表达质粒CMV-EGFP-LINC00473瞬时转染 | 第56页 |
| 5.2.6 实时荧光定量PCR | 第56页 |
| 5.2.7 WESTERNBLOT | 第56页 |
| 5.2.8 TRANSWELL迁移实验 | 第56页 |
| 5.2.9 平板克隆形成实验 | 第56页 |
| 5.2.10 CCK-8细胞增殖实验 | 第56页 |
| 5.2.11 统计分析 | 第56页 |
| 5.3 结果 | 第56-62页 |
| 5.3.1 LINC00473过表达效果验证 | 第57页 |
| 5.3.2 LINC00473过表达抑制BGC-823、MGC-803细胞的增殖 | 第57-59页 |
| 5.3.3 LINC00473过表达抑制BGC-823、MGC-803细胞的迁移能力 | 第59-61页 |
| 5.3.4 LINC00473过表达抑制EMT的发生 | 第61-62页 |
| 5.4 讨论 | 第62-63页 |
| 第六章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 6.1 结论 | 第63页 |
| 6.2 展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
