| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 主要符号对照表 | 第10-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-15页 |
| 1.1 国内外研究现状及发展动态分析 | 第11-13页 |
| 1.2 研究内容及意义 | 第13-15页 |
| 第2章 材料与方法 | 第15-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第15-25页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.2 溶液的配置 | 第16-17页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第17-18页 |
| 2.1.4 菌种和质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.5 引物 | 第19-25页 |
| 2.1.6 培养基 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-36页 |
| 2.2.1 菌株的培养 | 第25页 |
| 2.2.2 分子生物学实验操作 | 第25-31页 |
| 2.2.2.1 大肠杆菌基因组提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2.2 质粒的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2.3 PCR反应体系 | 第27-28页 |
| 2.2.2.4 DNA片段的琼脂糖凝胶回收 | 第28-29页 |
| 2.2.2.5 GoldenGate载体组装法的PCR反应体系与条件 | 第29页 |
| 2.2.2.6 质粒的化学转化 | 第29-30页 |
| 2.2.2.7 质粒的鉴定 | 第30页 |
| 2.2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.2.9 大肠杆菌感受态细胞的电转化 | 第31页 |
| 2.2.3 质粒的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.4 无质粒一步法CAGO基因组编辑步骤 | 第33-35页 |
| 2.2.4.1 构建CAGO编辑片段 | 第33-34页 |
| 2.2.4.2 CAGO基因组编辑程序 | 第34-35页 |
| 2.2.5 CMGE多基因编辑步骤 | 第35-36页 |
| 第3章 结果与分析 | 第36-45页 |
| 3.1 基于CRISPR/CAS9的无质粒一步法CAGO基因组编辑技术 | 第36-41页 |
| 3.1.1 CRISPR/Cas9无质粒一步法CAGO基因组编辑技术的设计 | 第36-38页 |
| 3.1.2 使用CAGO对PAM-free区域进行无脱靶的基因组编辑 | 第38-39页 |
| 3.1.3 使用CAGO方便快速的对多个位点进行连续的基因组编辑 | 第39-40页 |
| 3.1.4 使用CAGO实现基因组上的大片段缺失 | 第40-41页 |
| 3.2 基于CRISPR/CAS9的多基因编辑技术 | 第41-45页 |
| 3.2.1 基于CRISPR/Cas9多基因编辑技术的设计 | 第41-42页 |
| 3.2.2 多gRNA表达质粒pMgRNA的模块化构建 | 第42-43页 |
| 3.2.3 对poxb、lacz、ldhA和pta的基因组编辑 | 第43-45页 |
| 第4章 结论与展望 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录A 类似N20PAM的区域在CAS9/GRNA表达后的分析结果 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-54页 |
| 在学期间的科研情况 | 第54页 |
