| 中文摘要 | 第4-8页 |
| abstract | 第8-12页 |
| 引言 | 第20-22页 |
| 第一篇 文献综述 | 第22-56页 |
| 第1章 肢端黑色素瘤概述 | 第22-30页 |
| 1.1 背景 | 第22-23页 |
| 1.2 ALM的发病机制 | 第23页 |
| 1.3 临床症状 | 第23-24页 |
| 1.4 组织学特征 | 第24-25页 |
| 1.5 诊断与鉴别诊断 | 第25-26页 |
| 1.6 治疗 | 第26-28页 |
| 1.7 预后 | 第28-29页 |
| 1.8 总结 | 第29-30页 |
| 第2章 恶性黑色素瘤靶向药物治疗 | 第30-56页 |
| 2.1 针对恶性黑色素瘤主要特异信号通路的靶向治疗 | 第32-45页 |
| 2.1.1 BRAF抑制剂 | 第33-38页 |
| 2.1.2 C-kit通路的靶向治疗 | 第38-44页 |
| 2.1.3 MEK抑制剂 | 第44-45页 |
| 2.2 抗肿瘤新生血管的靶向治疗 | 第45-48页 |
| 2.3 免疫靶向和辅助治疗 | 第48-51页 |
| 2.4 PI3K抑制剂 | 第51-52页 |
| 2.5 活病毒制剂和抗肿瘤疫苗 | 第52-53页 |
| 2.6 中药及其他靶向治疗 | 第53-56页 |
| 第二篇 实验内容 | 第56-170页 |
| 第1章 靶向MC1R重组毒素Α-MSH-PE38_(KDEL)高效表达及特性分析 | 第56-70页 |
| 1.1 材料 | 第56-58页 |
| 1.1.1 材料 | 第56-58页 |
| 1.2 方法 | 第58-65页 |
| 1.2.1 优化a-MSH-PE38_(KDEL)基因引物的设计 | 第58-59页 |
| 1.2.2 PE38KDEL基因的获得 | 第59页 |
| 1.2.3 优化a-MSH-PE38_(KDEL)基因的构建 | 第59-60页 |
| 1.2.4 PCR产物的回收 | 第60-61页 |
| 1.2.5 回收PCR产物的鉴定 | 第61页 |
| 1.2.6 表达重组毒素质粒的构建 | 第61-62页 |
| 1.2.7 大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞制备 | 第62页 |
| 1.2.8 连接产物转化表达菌Rosseta(DE3) | 第62-63页 |
| 1.2.9 重组质粒的鉴定及重组菌株的筛选 | 第63页 |
| 1.2.10 重组蛋白pET-30a-a-MSH-PE38_(KDEL)的诱导表达与鉴定 | 第63-65页 |
| 1.3 结果 | 第65-67页 |
| 1.3.1 a-MSH-PE38_(KDEL)基因的构建与PCR扩增 | 第65页 |
| 1.3.2 表达载体的构建 | 第65页 |
| 1.3.3 重组蛋白a-MSH-PE38_(KDEL)的表达与鉴定 | 第65-66页 |
| 1.3.4 重组毒素的细胞活性检测 | 第66-67页 |
| 1.4 讨论 | 第67-68页 |
| 1.4.1 构建免疫毒素 | 第67-68页 |
| 1.4.2 基因工程菌目的蛋白表达量的提高 | 第68页 |
| 1.5 小结 | 第68-70页 |
| 第2章 A-MSH-PE38_(KDEL)纯化方法的建立及优化 | 第70-90页 |
| 2.1 材料和方法 | 第70-76页 |
| 2.1.1 材料 | 第70页 |
| 2.1.2 方法 | 第70-76页 |
| 2.2 结果 | 第76-85页 |
| 2.2.1 目的蛋白表达条件优化结果 | 第76-77页 |
| 2.2.2 目的蛋白表达及可溶性分析 | 第77页 |
| 2.2.3 可溶性表达目的蛋白的亲和层析纯化结果 | 第77-78页 |
| 2.2.4 饱和硫酸铵初步纯化结果 | 第78-80页 |
| 2.2.5 疏水层析纯化结果 | 第80-81页 |
| 2.2.6 离子交换层析最佳pH分析 | 第81页 |
| 2.2.7 a-MSH-PE38_(KDEL)可溶性表达产物纯化的最终策略 | 第81-82页 |
| 2.2.8 重组蛋白a-MSH-PE38_(KDEL)包涵体复性结果 | 第82-85页 |
| 2.3 讨论 | 第85-88页 |
| 2.3.1 重组蛋白纯化方法的选择 | 第85-86页 |
| 2.3.2 重组蛋白表达条件的优化 | 第86页 |
| 2.3.3 重组蛋白和纯化方法的优化 | 第86-88页 |
| 2.4 小结 | 第88-90页 |
| 第3章 纯化后A-MSH-PE38_(KDEL)相关性质分析 | 第90-104页 |
| 3.1 材料与方法 | 第90-94页 |
| 3.1.1 材料 | 第90-91页 |
| 3.1.2 方法 | 第91-94页 |
| 3.2 结果 | 第94-100页 |
| 3.2.1 冻干保护剂的选择 | 第94页 |
| 3.2.2 受体竞争结合结果 | 第94-95页 |
| 3.2.3 敏感性靶细胞筛选结果 | 第95-97页 |
| 3.2.4 重组免疫毒素a-MSH-PE38_(KDEL)对细胞活性的影响 | 第97-98页 |
| 3.2.5 a-MSH-PE38_(KDEL)的细胞靶谱确定 | 第98-99页 |
| 3.2.6 a-MSH-PE38_(KDEL)可以诱导靶细胞凋亡 | 第99-100页 |
| 3.3 讨论 | 第100-102页 |
| 3.3.1 蛋白冻干保护剂的选择 | 第100-101页 |
| 3.3.2 重组毒素杀伤细胞的作用分析 | 第101-102页 |
| 3.4 小结 | 第102-104页 |
| 第4章 A-MSH-PE38_(KDEL)动物试验的药效与安全评价 | 第104-140页 |
| 4.1 材料与方法 | 第105-110页 |
| 4.1.1 材料 | 第105-106页 |
| 4.1.2 方法 | 第106-110页 |
| 4.2 结果 | 第110-138页 |
| 4.2.1 荷瘤BALB/c小鼠的生存状态观察 | 第110页 |
| 4.2.2 a-MSH-PE38_(KDEL)在血液中的半衰期 | 第110页 |
| 4.2.3 最大安全剂量 | 第110-111页 |
| 4.2.4 动物模型的建立 | 第111-112页 |
| 4.2.5 动物模型的治疗 | 第112-138页 |
| 4.3 讨论 | 第138-139页 |
| 4.4 小结 | 第139-140页 |
| 第5章 细胞MC1R表达量及靶向分析 | 第140-150页 |
| 5.1 材料与方法 | 第140-145页 |
| 5.1.1 材料 | 第140页 |
| 5.1.2 方法 | 第140-145页 |
| 5.2 结果 | 第145-147页 |
| 5.2.1 Western-blotting检测结果 | 第145页 |
| 5.2.2 Real-timePCR结果 | 第145-146页 |
| 5.2.3 重组毒素a-MSH-PE38_(KDEL)对3种细胞的杀伤作用分析 | 第146-147页 |
| 5.3 讨论 | 第147-148页 |
| 5.4 小结 | 第148-150页 |
| 第6章 黑色素瘤及周围组织靶向信息学分析 | 第150-170页 |
| 6.1 材料与方法 | 第151-161页 |
| 6.1.1 材料 | 第151页 |
| 6.1.2 实验方法 | 第151-161页 |
| 6.2 结果 | 第161-167页 |
| 6.2.1 临床黑色素瘤和癌旁组织的TCEAL7低表达 | 第161-162页 |
| 6.2.2 TCEAL7在恶性黑色素瘤细胞增殖、凋亡与肿瘤发生过程中的作用分析 | 第162-164页 |
| 6.2.3 黑色素瘤细胞MiR-758下调TCEAL7表达 | 第164-166页 |
| 6.2.4 miR-758抑制TCEAL7表达来促进黑色素瘤细胞生长,抑制凋亡 | 第166-167页 |
| 6.3 讨论 | 第167-168页 |
| 6.4 小结 | 第168-170页 |
| 结论 | 第170-172页 |
| 参考文献 | 第172-192页 |
| 导师简介 | 第192-194页 |
| 作者简介及在学期间所获得的科研成果 | 第194-196页 |
| 致谢 | 第196页 |
