| 摘要 | 第13-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第17-30页 |
| 1.1 引言 | 第17页 |
| 1.2 牛病毒性腹泻病毒 | 第17-20页 |
| 1.2.1 BVDV的分类 | 第17页 |
| 1.2.2 BVDV结构和功能 | 第17-19页 |
| 1.2.3 BVDV的致病性及致病机制 | 第19页 |
| 1.2.4 牛病毒性腹泻-黏膜病的流行病学 | 第19-20页 |
| 1.3 抗病毒天然免疫 | 第20-23页 |
| 1.3.1 天然免疫系统 | 第20页 |
| 1.3.2 抗病毒天然免疫受体 | 第20-22页 |
| 1.3.3 Ⅰ型干扰素信号通路 | 第22页 |
| 1.3.4 瘟病毒蛋白拮抗Ⅰ型干扰素信号通路作用 | 第22-23页 |
| 1.4 瘟病毒属非结构蛋白Npro | 第23-26页 |
| 1.4.1 非结构蛋白Npro | 第23页 |
| 1.4.2 Npro蛋白的分子生物学功能 | 第23-26页 |
| 1.5 转录因子ELF4 | 第26-29页 |
| 1.5.1 ETS家族研究进展 | 第26-27页 |
| 1.5.2 转录因子ELF4分子生物学功能 | 第27-29页 |
| 1.6 研究的目的与意义 | 第29-30页 |
| 2.牛ELF4介导Ⅰ型干扰素表达调控的作用 | 第30-54页 |
| 2.1 材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1 载体、细胞、病毒 | 第30页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 2.1.3 引物 | 第30-32页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第32页 |
| 2.2 方法 | 第32-41页 |
| 2.2.1 细胞培养与病毒增殖 | 第32-33页 |
| 2.2.2 病毒及细胞的RNA提取及反转录 | 第33-34页 |
| 2.2.3 BoELF4真核表达载体的构建 | 第34-36页 |
| 2.2.4 BoIFNβ3-luc、BoIFNβ1-luc荧光素酶报告基因质粒的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.5 靶向BoELF4的shRNA重组质粒的构建 | 第37页 |
| 2.2.6 293T细胞的转染 | 第37-38页 |
| 2.2.7 BoIFNβ3-luc、BoIFNβ1-luc荧光素酶活性检测 | 第38页 |
| 2.2.8 BoELF4、BoELF4-shRNA质粒电转染MDBK细胞 | 第38-39页 |
| 2.2.9 BoIFNβ3、BoISG15的转录水平的qPCR检测 | 第39页 |
| 2.2.10 转染BoELF4质粒的293T、MDBK细胞的Western blot检测 | 第39-40页 |
| 2.2.11 转染BoELF4质粒的293T、MDBK细胞的Native -PAGE检测 | 第40-41页 |
| 2.2.12 转染BoELF4的293T细胞的核质分离 | 第41页 |
| 2.2.13 转染BoELF4及其截短体的间接免疫荧光分析 | 第41页 |
| 2.2.14 统计学方法 | 第41页 |
| 2.3 结果 | 第41-51页 |
| 2.3.1 BoMAVS、BoTBK1、BoELF4、BoIRF3目的基因的扩增结果 | 第41-42页 |
| 2.3.2 构建的BoMAVS、BoTBK1、BoELF4、BoIRF3质粒的鉴定结果 | 第42-43页 |
| 2.3.3 BoMAVS、BoTBK1、BoELF4、BoIRF3质粒的表达检测结果 | 第43页 |
| 2.3.4 BoELF4对HuIFN-β启动子激活活性的影响 | 第43-45页 |
| 2.3.5 BoELF4对BoIFN-β3启动子激活活性的影响 | 第45-46页 |
| 2.3.6 BoELF4在MDBK细胞中过表达IFNβ3及ISG15的转录水平变化 | 第46-47页 |
| 2.3.7 靶向BoELF4基因shRNA重组质粒的对BoELF4及其下游分子表达的影响 | 第47-48页 |
| 2.3.8 BoELF4不同结构域缺失对其功能的影响 | 第48-49页 |
| 2.3.9 病毒刺激对BoELF4亚细胞定位的影响 | 第49-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-53页 |
| 2.5 小结 | 第53-54页 |
| 3 BVDV感染过程中BoELF4的表达及调控作用 | 第54-65页 |
| 3.1 材料 | 第54-56页 |
| 3.1.1 质粒、细胞、病毒 | 第54页 |
| 3.1.2 试剂 | 第54页 |
| 3.1.3 引物 | 第54-55页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第55-56页 |
| 3.2 方法 | 第56页 |
| 3.2.1 主要方法 | 第56页 |
| 3.2.2 小鼠腹腔巨噬细胞的制备 | 第56页 |
| 3.3结果 | 第56-62页 |
| 3.3.1 BVDV感染对BoIFNβ3启动子激活活性的影响 | 第56页 |
| 3.3.2 BoELF4对BVDV激活BoIFNβ3启动子激活活性的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.3 BoELF4诱导Ⅰ型干扰素对BVDV感染作用的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.4 BVDV在MDBK细胞中增殖过程中Ⅰ型干扰素通路重要因子转录水平变化 | 第58-60页 |
| 3.3.5 BVDV刺激对鼠iBMDM细胞产生Ⅰ型IFNs的影响 | 第60页 |
| 3.3.6 BVDV刺激对鼠腹腔巨噬细胞产生Ⅰ型IFNs的影响 | 第60-61页 |
| 3.3.7 BVDV刺激对小鼠模型产生Ⅰ型IFNs的影响 | 第61-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62-64页 |
| 3.5 小结 | 第64-65页 |
| 4 BVDV非结构蛋白Npro对BoELF4的拮抗作用 | 第65-74页 |
| 4.1 材料 | 第65-66页 |
| 4.1.1 质粒、细胞、病毒 | 第65页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第65页 |
| 4.1.3 引物 | 第65页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第65-66页 |
| 4.2 方法 | 第66页 |
| 4.2.1 主要方法 | 第66页 |
| 4.3 结果 | 第66-72页 |
| 4.3.1 Npro表达载体的构建 | 第66-67页 |
| 4.3.2 Npro对BoELF4激活BoIFNβ3启动子的影响 | 第67-68页 |
| 4.3.3 Npro对BoELF4诱导Ⅰ型IFN产生的影响 | 第68-69页 |
| 4.3.4 转染Npro质粒对BoELF4蛋白水平的影响 | 第69-70页 |
| 4.3.5 蛋白酶体抑制剂对Npro蛋白介导降解BoELF4蛋白的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.6 锌指结构位点对Npro蛋白介导降解BoELF4蛋白的影响 | 第71页 |
| 4.3.7 病毒刺激后Npro蛋白及BoELF4蛋白的亚细胞定位 | 第71-72页 |
| 4.4 讨论 | 第72-73页 |
| 4.5 小结 | 第73-74页 |
| 5 结论 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-87页 |
| 附录 | 第87-90页 |
| 个人简历 | 第90页 |
