| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 符号说明(缩略语词汇表) | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-41页 |
| 1. Sox2、c-Myc和Oct4基因研究进展 | 第15-22页 |
| 1.1 Sox2基因研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2 c-Myc基因研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3 Oct4基因研究进展 | 第19-22页 |
| 2. 真核生物转录调控 | 第22-26页 |
| 2.1 真核生物基因结构 | 第22-23页 |
| 2.2 真核生物基因的转录 | 第23-26页 |
| 2.2.1 调控基因的顺式作用元件 | 第24-25页 |
| 2.2.2 参与基因调控的反式作用因子 | 第25-26页 |
| 3. 基因甲基化的研究进展 | 第26-31页 |
| 3.1 基因甲基化 | 第26-28页 |
| 3.2 基因的去甲基化 | 第28-29页 |
| 3.3 基因甲基化检测方法 | 第29-31页 |
| 3.3.1. 甲基化特异性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP) | 第29-30页 |
| 3.3.2 亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR BSP) | 第30页 |
| 3.3.3 高分辨率熔解曲线法(High Resolution Melting,HRM) | 第30-31页 |
| 4. 组蛋白乙酰化 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-41页 |
| 第二章 Sox2、c-Myc和Oct4基因启动子克隆及其活性分析 | 第41-71页 |
| 1 材料和方法 | 第41-55页 |
| 1.1 试验材料 | 第41-43页 |
| 1.1.1 试验动物和载体质粒 | 第41页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第41-42页 |
| 1.1.3 试验仪器 | 第42-43页 |
| 1.2 试验方法 | 第43-55页 |
| 1.2.1 徐淮山羊Sox2、c-Myc和Oct4基因启动子区域的生物信息学分析 | 第43页 |
| 1.2.2 徐淮山羊全血基因组的提取 | 第43-44页 |
| 1.2.3 徐淮山羊Sox2、c-Myc和Oct4基因启动子克隆 | 第44-47页 |
| 1.2.3.1 质粒转化 | 第45-46页 |
| 1.2.3.2 鉴定阳性克隆 | 第46页 |
| 1.2.3.3 质粒的小量提取 | 第46页 |
| 1.2.3.4 质粒酶切鉴定及浓度测定 | 第46-47页 |
| 1.2.4 徐淮山羊Sox2、c-Myc和Oct4基因启动子各缺失片段的克隆 | 第47-49页 |
| 1.2.5 荧光素酶表达载体PGL3-Sox2pro、PGL3-c-Mycpro和PGL3-Oct4pro的构建 | 第49-52页 |
| 1.2.6 pEGFP-N1启动子的置换 | 第52-53页 |
| 1.2.7 细胞培养及瞬时转染 | 第53-54页 |
| 1.2.8 Sox2、c-Myc和Oct4基因启动子活性分析 | 第54-55页 |
| 2 结果 | 第55-61页 |
| 2.1 徐淮山羊基因组DNA的提取 | 第55页 |
| 2.2 徐淮山羊Sox2、c-Myc和Oct4基因启动子克隆 | 第55-56页 |
| 2.3 荧光素酶表达载体PGL3-Sox2pro、PGL3-c-Mycpro和PGL3-Oct4酶切鉴定 | 第56-58页 |
| 2.4 Sox2、c-Myc和Oct4基因启动子活性的定性分析 | 第58-59页 |
| 2.5 Sox2、c-Myc和Oct4基因启动子活性分析 | 第59-61页 |
| 3 讨论 | 第61-65页 |
| 3.1 启动子结构与功能 | 第61-62页 |
| 3.2 5'端缺失技术和双焚光素梅报告基因检测系统 | 第62-63页 |
| 3.3 Sox2基因启动子功能分析 | 第63页 |
| 3.4 c-Myc基因启动子功能分析 | 第63-64页 |
| 3.5 Oct4基因启动子功能分析 | 第64页 |
| 3.6 转染所用细胞 | 第64页 |
| 3.7 启动子功能与启动子片段长度的关系 | 第64-65页 |
| 4 结论 | 第65页 |
| 5 参考文献 | 第65-71页 |
| 第三章 Sox2、c-Myc、Oct4基因核心启动子区域调控元件的分析 | 第71-87页 |
| 1 材料和方法 | 第71-76页 |
| 1.1 试验材料 | 第71-72页 |
| 1.1.1 载体 | 第71-72页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第72页 |
| 1.1.3 试验仪器 | 第72页 |
| 1.2 试验方法 | 第72-75页 |
| 1.2.1 徐淮山羊Sox2、c-Myc和Oct4基因启动子区域的生物信息学分析 | 第72-73页 |
| 1.2.2 转录因子结合位点突变的启动子报告基因载体的构建 | 第73-75页 |
| 1.2.2.1 转录因子结合位点突变引物的设计 | 第73-74页 |
| 1.2.2.2 转录因子结合位点突变片段的扩增 | 第74-75页 |
| 1.2.2.3 转录因子结合位点突变片段的产物回收 | 第75页 |
| 1.2.2.4 转录因子结合位点突变片段的产物的Blunting Kination反应 | 第75页 |
| 1.2.2.5 转录因子结合位点突变片段的产物的连接反应 | 第75页 |
| 1.2.2.6 转录因子结合位点突变片段连接产物的转化 | 第75页 |
| 1.3 细胞培养及瞬时转染 | 第75-76页 |
| 1.4 突变质粒PGL3-Sox2,PGL3-c-Myc以及PGL3-Oct4的荧光素酶活性分析 | 第76页 |
| 2 结果 | 第76-80页 |
| 2.1 Sox2、c-Myc和Oct4基因启动子区域的生物学信息预测 | 第76-78页 |
| 2.2 突变质粒的双荧光素酶活性分析 | 第78-80页 |
| 3 讨论 | 第80-82页 |
| 4 结论 | 第82页 |
| 5 参考文献 | 第82-87页 |
| 第四章 Sox2、c-Myc和Oct4启动子甲基化和乙酰化分析 | 第87-103页 |
| 1 材料和方法 | 第87-90页 |
| 1.1 试验材料 | 第87-88页 |
| 1.1.1 载体 | 第87页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第87-88页 |
| 1.1.3 试验仪器 | 第88页 |
| 1.2 试验方法 | 第88-90页 |
| 1.2.1 Sox2、c-Myc和Oct4启动子甲基化预测 | 第88-89页 |
| 1.2.2 细胞培养及瞬时转染 | 第89页 |
| 1.2.3 Sox2、c-Myc和Oct4基因启动子活性分析 | 第89-90页 |
| 2 结果 | 第90-96页 |
| 2.1 Sox2、c-Myc和Oct4启动子甲基化预测 | 第90-91页 |
| 2.2 5-Azadc最佳诱导浓度的筛选 | 第91-92页 |
| 2.3 TSA最佳诱导浓度的筛选 | 第92页 |
| 2.4 VPA最佳诱导浓度的筛选 | 第92-93页 |
| 2.5 NFAT1对c-Myc最佳诱导浓度的筛选 | 第93-94页 |
| 2.6 5-Azadc和TSA对Sox2基因启动子的联合诱导 | 第94-95页 |
| 2.7 5-Azadc和TSA对c-Myc启动子活性的联合诱导 | 第95页 |
| 2.8 5-Azadc和TSA对Oct4启动子活性的联合诱导 | 第95-96页 |
| 3 讨论 | 第96-98页 |
| 4 结论 | 第98页 |
| 5 参考文献 | 第98-103页 |
| 全文结论 | 第103-104页 |
| 附录 | 第104-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 攻读学位期间发表的学位论文 | 第108-109页 |
