| 目录 | 第3-7页 |
| 缩略语表 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-13页 |
| Abstract | 第13-18页 |
| 前言 | 第19-21页 |
| 文献回顾 | 第21-48页 |
| 1. 胰岛素样生长因子受体和胰岛素受体 | 第22-36页 |
| 2. 泛素介导的蛋白质的降解 | 第36-48页 |
| 第一部分 重组泛素连接酶的构建和功能学验证 | 第48-59页 |
| 前言 | 第48-49页 |
| 1.材料 | 第49-50页 |
| 1.1 细胞株 | 第49页 |
| 1.2 主要试剂 | 第49-50页 |
| 1.3 主要仪器 | 第50页 |
| 2.方法 | 第50-53页 |
| 2.1 细胞培养 | 第50页 |
| 2.2 pFLAGCMV4PTBUbox（H260Q）的重组载体的构建 | 第50-51页 |
| 2.3 重组泛素连接酶对 IGF1R/IR 蛋白水平的影响 | 第51-52页 |
| 2.4 实时定量 PCR | 第52-53页 |
| 3.结果 | 第53-56页 |
| 3.1 pFLAGCMV4PTBUbox（H260Q）的重组载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.2 重组泛素连接酶对 IGF1R/IR 蛋白水平的影响 | 第54-56页 |
| 4.讨论 | 第56-59页 |
| 第二部分 重组泛素连接酶与靶蛋白相互结合 | 第59-72页 |
| 前言 | 第59页 |
| 1.材料 | 第59-60页 |
| 1.1 细胞株 | 第59页 |
| 1.2 主要试剂 | 第59-60页 |
| 1.3 主要仪器 | 第60页 |
| 2.方法 | 第60-65页 |
| 2.1 细胞培养 | 第60-61页 |
| 2.2 IGF1R/IR 的活化验证 | 第61-62页 |
| 2.3 重组泛素连接酶与 IGF1R/IR 的相互结合 | 第62-63页 |
| 2.4 IGF1R/IR 的泛素化实验 | 第63-64页 |
| 2.5 蛋白酶体抑制剂对重组泛素连接酶作用的逆转 | 第64页 |
| 2.6 重组泛素连接酶对 IGF1R/IR 蛋白稳定性的影响 | 第64-65页 |
| 3.结果 | 第65-70页 |
| 3.1 IGF1R/IR 的活化验证 | 第65-66页 |
| 3.2 重组泛素连接酶与 IGF1R/IR 的相互结合 | 第66-67页 |
| 3.3 IGF1R/IR 的泛素化实验 | 第67-68页 |
| 3.4 蛋白酶体抑制剂对重组泛素连接酶作用的逆转 | 第68-69页 |
| 3.5 重组泛素连接酶对 IGF1R/IR 蛋白稳定性的影响 | 第69-70页 |
| 4.讨论 | 第70-72页 |
| 第三部分 重组泛素连接酶对肿瘤细胞生物学行为的影响 | 第72-89页 |
| 前言 | 第72页 |
| 1.材料 | 第72-74页 |
| 1.1 细胞株 | 第72页 |
| 1.2 主要试剂 | 第72-73页 |
| 1.3 主要仪器 | 第73-74页 |
| 2.方法 | 第74-78页 |
| 2.1 细胞培养 | 第74页 |
| 2.2 免疫印迹实验（Western blot） | 第74-75页 |
| 2.3 MTT 实验 | 第75页 |
| 2.4 Transwell 实验 | 第75页 |
| 2.5 细胞凋亡实验 | 第75-76页 |
| 2.6 药敏实验 | 第76页 |
| 2.7 实时定量 PCR | 第76-78页 |
| 2.8 统计学分析 | 第78页 |
| 3.结果 | 第78-85页 |
| 3.1 重组泛素连接酶对 IGF1R/IR 介导的信号通路活化程度的影响 | 第78-79页 |
| 3.2 细胞增殖实验 | 第79-80页 |
| 3.3 细胞转移和侵袭实验 | 第80-81页 |
| 3.4 药物敏感性实验 | 第81-83页 |
| 3.5 表皮间充质转化实验 | 第83-85页 |
| 4. 讨论 | 第85-89页 |
| 第四部分 重组泛素连接酶的腺病毒构建和裸鼠体内抑制实体瘤生长作用的研究 | 第89-100页 |
| 前言 | 第89页 |
| 1.材料 | 第89-91页 |
| 1.1 细胞株 | 第89页 |
| 1.2 实验动物 | 第89-90页 |
| 1.3 主要试剂 | 第90页 |
| 1.4 主要仪器 | 第90-91页 |
| 2.方法 | 第91-93页 |
| 2.1 细胞培养 | 第91页 |
| 2.2 裸鼠饲养 | 第91页 |
| 2.3 重组泛素连接酶的腺病毒载体构建 | 第91-92页 |
| 2.4 毒种的鉴定和扩增 | 第92页 |
| 2.5 免疫印迹实验（Western blot） | 第92-93页 |
| 2.6 裸鼠体内成瘤实验及重组腺病毒抑瘤作用的评估 | 第93页 |
| 3.结果 | 第93-97页 |
| 3.1 重组泛素连接酶的腺病毒载体构建 | 第93-95页 |
| 3.2 重组腺病毒靶向降解功能的验证 | 第95页 |
| 3.3 重组腺病毒在裸鼠体内抑瘤作用的评估 | 第95-97页 |
| 4.讨论 | 第97-100页 |
| 第五部分 重组泛素连接酶对肿瘤细胞糖代谢的影响 | 第100-113页 |
| 前言 | 第100页 |
| 1.材料 | 第100-102页 |
| 1.1 细胞株 | 第100-101页 |
| 1.2 主要试剂 | 第101页 |
| 1.3 主要仪器 | 第101-102页 |
| 2.方法 | 第102-106页 |
| 2.1 细胞培养 | 第102页 |
| 2.2 免疫印迹实验（Western blot） | 第102-103页 |
| 2.3 激光共聚焦实验 | 第103页 |
| 2.4 葡萄糖摄取实验 | 第103-104页 |
| 2.5 实时定量 PCR | 第104-105页 |
| 2.6 乳酸和丙酮酸生成实验 | 第105-106页 |
| 2.7 统计学分析 | 第106页 |
| 3.结果 | 第106-111页 |
| 3.1 重组泛素连接酶对 Glut4 细胞膜转位的影响 | 第106-108页 |
| 3.2 重组泛素连接酶对肿瘤细胞葡萄糖摄取的影响 | 第108-109页 |
| 3.3 重组泛素连接酶对肿瘤细胞糖酵解途径的影响 | 第109-111页 |
| 4.讨论 | 第111-113页 |
| 小结 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-123页 |
| 个人简历和研究成果 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
