| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 兰科植物及兰科菌根真菌共生研究综述 | 第10-18页 |
| 1. 兰科植物及其菌根研究概况 | 第10-12页 |
| 1.1 兰科植物概况 | 第10页 |
| 1.2 兰科菌根概况 | 第10-11页 |
| 1.3 兰科菌根真菌研究概况 | 第11页 |
| 1.4 兰科菌根真菌的生态功能 | 第11-12页 |
| 2. 兰科植物与菌根真菌互作及共生研究现状 | 第12-13页 |
| 3. 丝状真菌遗传转化体系在真菌与植物互作中应用 | 第13-15页 |
| 3.1 丝状真菌遗传转化研究概况 | 第13页 |
| 3.2 PEG 介导的真菌遗传转化概况 | 第13-14页 |
| 3.3 ATMT 机理及其在真菌转化中应用 | 第14-15页 |
| 3.4 GFP 基因在丝状真菌中表达和应用 | 第15页 |
| 4．兰科植物黄花白及及其生物学 | 第15-16页 |
| 5．本研究的目的和意义 | 第16-18页 |
| 第二章 兰科菌根真菌与兰科植物黄花白及共生关系的研究 | 第18-30页 |
| 1．前言 | 第18页 |
| 2．材料 | 第18-19页 |
| 2.1 黄花白及植株和种子 | 第18页 |
| 2.2 培养基 | 第18-19页 |
| 3. 方法 | 第19-22页 |
| 3.1 菌根真菌的分离与保存 | 第19-20页 |
| 3.1.1 菌根真菌的分离 | 第19-20页 |
| 3.1.2 菌根真菌的保藏 | 第20页 |
| 3.2 筛选促进黄花白及种子萌发率的菌根真菌 | 第20-21页 |
| 3.3 促生菌根真菌鉴定 | 第21-22页 |
| 3.3.1 促生菌根真菌形态鉴定 | 第21页 |
| 3.3.2 促生菌根真菌分子鉴定 | 第21-22页 |
| 4．结果与分析 | 第22-27页 |
| 4.1 菌根真菌鉴定 | 第22-24页 |
| 4.2 种子萌发率的统计和分析 | 第24-25页 |
| 4.3 黄花白及与菌根真菌共生 | 第25-26页 |
| 4.4 共生培养基的选择 | 第26-27页 |
| 5．讨论 | 第27-30页 |
| 5.1 菌根真菌的分离与保存 | 第27-28页 |
| 5.1.1 消毒时间对菌根真菌分离的影响 | 第27-28页 |
| 5.1.2 不同保菌方法对菌株的影响 | 第28页 |
| 5.2 共生培养基对共生的影响 | 第28页 |
| 5.3 菌根真菌 Epulorhiza sp. 和 Sebacina sp. 的促生效应 | 第28-30页 |
| 第三章 兰科菌根真菌 Sebacina sp.的 EGFP 基因的遗传转化 | 第30-46页 |
| 1．前言 | 第30页 |
| 2 材料 | 第30-33页 |
| 2.1 菌株载体 | 第30页 |
| 2.2 药品试剂 | 第30-32页 |
| 2.3 培养基 | 第32-33页 |
| 3．方法 | 第33-38页 |
| 3.1 原生质体的制备 | 第33-34页 |
| 3.1.1 Sebacina sp. 菌丝的培养和收集 | 第33页 |
| 3.1.2 酶解时间和维稳剂 | 第33页 |
| 3.1.3 原生质体的纯化 | 第33-34页 |
| 3.1.4 原生质体核染色 | 第34页 |
| 3.1.5 原生质体复生 | 第34页 |
| 3.2 PEG 介导 GFP 基因的遗传转化 | 第34-36页 |
| 3.2.1 Sebacina sp.菌株潮霉素敏感性测试 | 第34页 |
| 3.2.2 质粒 DNA 的提取与 GFP 基因的 PCR 分析 | 第34-35页 |
| 3.2.3 原生质体 PEG 介导转化 | 第35-36页 |
| 3.3 农杆菌介导 Sebacina sp. 菌丝体转化 | 第36-38页 |
| 3.3.1 农杆菌抗潮霉素基因（hyh）PCR 验证 | 第36-37页 |
| 3.3.2 农杆菌诱导培养 | 第37页 |
| 3.3.3 农杆菌介导转化 | 第37-38页 |
| 4．结果和分析 | 第38-43页 |
| 4.1 原生质体的制备 | 第38-41页 |
| 4.1.1 制备原生质体菌龄的选择 | 第38页 |
| 4.1.2 原生质体维稳剂和酶解时间 | 第38-39页 |
| 4.1.3 原生质体核染色 | 第39-40页 |
| 4.1.4 原生质体复生 | 第40-41页 |
| 4.2 PEG 介导 GFP 基因转化的初步实验 | 第41-42页 |
| 4.2.1 Sebacina sp. 菌株潮霉素敏感性测试 | 第41-42页 |
| 4.2.2 GFP 基因表达载体的 PCR 分析 | 第42页 |
| 4.2.3 转化子的筛选 | 第42页 |
| 4.4 农杆菌介导 Sebacina sp. 菌丝体转化 | 第42-43页 |
| 4.4.1 农杆菌 HYH 基因 PCR 验证 | 第42页 |
| 4.4.2 农杆菌介导 Sebacina sp. 菌丝体转化初步试验 | 第42-43页 |
| 5. 讨论 | 第43-46页 |
| 5.1 原生质体的制备和复生 | 第43-44页 |
| 5.2 原生质体的 PEG 介导转化 | 第44-45页 |
| 5.3 根癌农杆菌介导的菌丝体的遗传转化 | 第45-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 研究生期间发表论文 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
