| 摘要 | 第2-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 符号与缩略语说明 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 农杆菌简介 | 第10-15页 |
| 1.1.1 农杆菌生物学特性及分类 | 第10页 |
| 1.1.2 Ti质粒的结构与功能 | 第10-12页 |
| 1.1.2.1 T-DNA区 | 第11-12页 |
| 1.1.2.2 Vir区 | 第12页 |
| 1.1.3 Ⅳ型分泌系统结构与功能 | 第12-13页 |
| 1.1.4 根癌农杆菌介导的T-DNA转化过程 | 第13-15页 |
| 1.1.5 根癌农杆菌在转基因方面的应用情况 | 第15页 |
| 1.2 根癌农杆菌T-复合物招募蛋白 | 第15-18页 |
| 1.2.1 VBP生物学特征与功能 | 第15-17页 |
| 1.2.2 vbp2启动子分析情况 | 第17-18页 |
| 1.3 报告基因的选择与应用 | 第18-19页 |
| 1.4 研究内容、目的与意义 | 第19-21页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.4.2 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 实验所用菌株、质粒、引物 | 第21-23页 |
| 2.1.2 实验所用培养基与试剂配方 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验所用工具酶与试剂盒 | 第24-25页 |
| 2.1.4 实验所用仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-36页 |
| 2.2.1 构建原位替代菌株C58~(vbp2→rfp)的方法 | 第25-31页 |
| 2.2.1.1 质粒的提取 | 第26页 |
| 2.2.1.2 PCR扩增vbp2上游526 bp+rfp+vbp2下游1 kb片段 | 第26-28页 |
| 2.2.1.3 目的片段和载体的酶切与连接 | 第28页 |
| 2.2.1.4 连接产物的转化及重组质粒的筛选与鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.1.5 根癌农杆菌C58感受态细胞的制备及重组质粒的电转化 | 第29-31页 |
| 2.2.2 pCB301△1r-2R/GA的双荧光报告载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.2.1 pCB301左右边界的去除 | 第31-32页 |
| 2.2.2.2 重组质粒的构建、转化与筛选鉴定 | 第32页 |
| 2.2.2.3 pCB301△lr-2R/GA电转化农杆菌GMI9017△vbp2 | 第32页 |
| 2.2.3 不同长度启动子单荧光表达载体的构建方法 | 第32-33页 |
| 2.2.4 单位细菌总蛋白荧光强度定量启动子活性的方法 | 第33-34页 |
| 2.2.5 用不同诱导因子分别对vbp2启动子进行诱导的方法 | 第34-35页 |
| 2.2.5.1 用AS诱导vbp2启动子的方法 | 第34页 |
| 2.2.5.2 用不同pH诱导vbp2启动子的方法 | 第34页 |
| 2.2.5.3 用Rha诱导vbp2启动子的方法 | 第34-35页 |
| 2.2.6 vbp2启动子中响应不同诱导因素的调控区确定的方法 | 第35-36页 |
| 2.2.6.1 vbp2启动子中响应AS的调控区确定的方法 | 第35页 |
| 2.2.6.2 vbp2启动子中响应Rha的调控区确定的方法 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-55页 |
| 3.1 原位替代菌株应用于vbp2启动子活性研究中的可行性分析 | 第36-42页 |
| 3.1.1 原位替代菌株的构建 | 第36-42页 |
| 3.1.1.1 pEX18Km-rfp的构建 | 第37-39页 |
| 3.1.1.2 原位替代菌株C58~(vbp2→rfp)的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.1.1.3 原位替代菌株生长情况的分析 | 第40-41页 |
| 3.1.1.4 粗提液中荧光蛋白的含量与荧光强度的相关性分析 | 第41-42页 |
| 3.2 vbp2启动子受各诱导因子的诱导情况 | 第42-45页 |
| 3.2.1 AS对vbp2启动子活性的影响 | 第42-43页 |
| 3.2.2 pH对vbp2启动子活性的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.3 Rha对vbp2启动子活性的影响 | 第44-45页 |
| 3.3 vbp2启动子活性调控区域的确定 | 第45-55页 |
| 3.3.1 双、单荧光报告载体应用于vbp2启动子活性研究中的比较分析 | 第46-50页 |
| 3.1.1.1 双荧光报告载体与单荧光报告载体的构建 | 第46-49页 |
| 3.1.1.2 双、单荧光报告载体中AS对vbp2启动子诱导结果的比较 | 第49-50页 |
| 3.3.2 不同长度vbp2启动子单荧光报告载体的构建 | 第50-52页 |
| 3.3.2.1 不同长度vbp2启动子单荧光报告载体的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.2.2 不同长度vbp2启动子单荧光报告载体转入GMI9017△vbp2的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.3 vbp2启动子上响应AS的调控活性区域的确定 | 第52-53页 |
| 3.3.4 vbp2启动子上响应Rha的调控活性区域的确定 | 第53-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间取得的学术成果 | 第66-67页 |
