| 致谢 | 第7-12页 |
| 摘要 | 第12-15页 |
| Abstract | 第15-18页 |
| 第一章 文献综述与研究背景 | 第19-34页 |
| 1.1 引言 | 第19页 |
| 1.2 病原物接种分析的影响因素 | 第19-20页 |
| 1.3 叶位对植物抗病性的影响 | 第20-22页 |
| 1.3.1 叶位相关抗病性(Leaf position-associated disease resistance) | 第20-21页 |
| 1.3.2 叶位相关抗病性的分子机理 | 第21-22页 |
| 1.4 植物天冬酰胺合成酶基因功能研究进展 | 第22-31页 |
| 1.4.1 天冬酰胺合成酶基因的发现与结构 | 第22-24页 |
| 1.4.2 植物天冬酰胺合成酶基因家族 | 第24-27页 |
| 1.4.3 植物天冬酰胺合成酶的反应机理 | 第27页 |
| 1.4.4 植物天冬酰胺合成酶的功能 | 第27-31页 |
| 1.4.4.1 植物ASN在氮代谢中的功能 | 第27-29页 |
| 1.4.4.2 植物ASN的除草剂靶酶功能 | 第29-30页 |
| 1.4.4.3 植物ASN的抗逆抗病功能 | 第30-31页 |
| 1.5 病毒诱导的基因沉默技术在植物基因功能研究中的应用 | 第31-32页 |
| 1.5.1 病毒诱导的基因沉默技术的原理 | 第31-32页 |
| 1.5.2 VIGS在植物基因功能研究中的应用 | 第32页 |
| 1.6 本研究的意义与主要内容 | 第32-34页 |
| 第二章 接种分析条件优化之叶位对植物抗病性的影响及其作用机制 | 第34-70页 |
| 1 前言 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-38页 |
| 2.1 材料 | 第35-36页 |
| 2.1.1 供试植物 | 第35页 |
| 2.1.2 供试病原物 | 第35页 |
| 2.1.3 供试试剂与培养基 | 第35-36页 |
| 2.2 研究方法 | 第36-38页 |
| 2.2.1 核盘菌接种分析 | 第36页 |
| 2.2.2 Xoo介导的HR分析 | 第36-37页 |
| 2.2.3 Pst DC3000与Pst DC3000(AvrRpt2~+)接种分析 | 第37页 |
| 2.2.4 烟草野火病菌(Pstab)接种分析 | 第37页 |
| 2.2.5 本氏烟叶片DAB染色分析 | 第37-38页 |
| 2.2.6 拟南芥不同叶位叶片基因表达谱分析 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-52页 |
| 3.1 叶位对拟南芥与普通烟核盘菌抗性的影响 | 第38-39页 |
| 3.2 叶位对本氏烟野火病抗性的影响 | 第39-40页 |
| 3.3 叶位对植物非寄主抗性的影响 | 第40-42页 |
| 3.4 叶位对拟南芥中Pst DC3000(AvrRpt2~+)介导的HR的影响 | 第42-43页 |
| 3.5 拟南芥不同叶位叶片的基因表达谱比较分析 | 第43-47页 |
| 3.6 激素在叶位相关的拟南芥抗核盘菌中的作用 | 第47-48页 |
| 3.7 激素对叶位相关的拟南芥与Xoo及Pst DC3000(AvrRpt2~+)互作的影响 | 第48-52页 |
| 4 讨论 | 第52-70页 |
| 4.1 叶位相关抗病性在植物中普遍存在且因植物病原物互作系统而异 | 第52-53页 |
| 4.2 叶位相关抗病性的分子基础 | 第53-54页 |
| 4.3 植物激素对叶位相关抗病性的影响因植物与病原物互作系统而异 | 第54-70页 |
| 第三章 番茄天冬酰胺合成酶基因的鉴定及其抗病调控功能的基因沉默分析 | 第70-90页 |
| 1 前言 | 第70页 |
| 2 材料与方法 | 第70-77页 |
| 2.1 材料 | 第70-71页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第70-71页 |
| 2.1.2 供试菌株与载体 | 第71页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第71页 |
| 2.2 研究方法 | 第71-77页 |
| 2.2.1 番茄与本氏烟ASN基因的鉴定 | 第72页 |
| 2.2.2 RNA的提取 | 第72页 |
| 2.2.3 SlASN基因的RT-PCR克隆 | 第72-73页 |
| 2.2.4 番茄ASN基因沉默结构构建与VIGS操作流程 | 第73-74页 |
| 2.2.5 番茄ASN沉默植株的表型分析与基因表达检测 | 第74-75页 |
| 2.2.6 番茄ASN基因功能分析 | 第75-77页 |
| 2.2.6.1 Cf-4/Avr4介导的HR分析 | 第75-76页 |
| 2.2.6.2 Xoo介导的HR分析 | 第76页 |
| 2.2.6.3 Pst DC3000接种分析 | 第76页 |
| 2.2.6.4 核盘菌接种分析 | 第76页 |
| 2.2.6.5 瓜果腐霉接种分析 | 第76-77页 |
| 3 结果与分析 | 第77-87页 |
| 3.1 番茄与本氏烟ASN基因序列的生物信息学分析 | 第77-80页 |
| 3.2 番茄SlASN基因沉默结构构建与VIGS处理 | 第80-81页 |
| 3.3 SlASN基因沉默效率检测及其对TRV抗性调控作用分析 | 第81-83页 |
| 3.4 SlASN基因对Cf-4/Avr4介导的过敏性坏死反应的调控作用 | 第83页 |
| 3.5 SlASN基因对Xoo介导的过敏性坏死反应的调控作用 | 第83-84页 |
| 3.6 SlASN基因对Pst DC3000的抗性调控作用 | 第84-85页 |
| 3.7 SlASN基因对核盘菌的抗性调控作用 | 第85-86页 |
| 3.8 SlASN基因对腐霉的抗性调控作用 | 第86-87页 |
| 4 结论 | 第87页 |
| 5 讨论 | 第87-90页 |
| 第四章 过量表达SlASN2转基因烟草的构建及转基因植株抗病功能分析 | 第90-117页 |
| 1 前言 | 第90页 |
| 2 材料与方法 | 第90-97页 |
| 2.1 材料 | 第90-92页 |
| 2.1.1 转化的受体植株 | 第90页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第90-91页 |
| 2.1.2.1 用于转基因植株构建 | 第91页 |
| 2.1.2.2 供试病原菌 | 第91页 |
| 2.1.3 培养基与试剂 | 第91-92页 |
| 2.2 研究方法 | 第92-97页 |
| 2.2.1 农杆菌介导的烟草叶盘转基因方法 | 第92-93页 |
| 2.2.1.1 农杆菌的培养 | 第92页 |
| 2.2.1.2 烟草叶盘的预培养与侵染 | 第92页 |
| 2.2.1.3 卡那抗性植株的再生 | 第92-93页 |
| 2.2.2 转基因烟草DNA的提取 | 第93页 |
| 2.2.3 转基因烟草RNA的提取 | 第93页 |
| 2.2.4 转基因烟草第一链cDNA的合成 | 第93-94页 |
| 2.2.5 转基因烟草阳性植株的鉴定 | 第94页 |
| 2.2.6 转基因烟草阳性植株SlASN2表达量检测 | 第94-95页 |
| 2.2.7 T1代SlASN2过表达转基因植株阳性苗筛选 | 第95页 |
| 2.2.8 T2代SlASN2过表达转基因阳性植株的抗病功能分析 | 第95-97页 |
| 2.2.8.1 Cf-4/Avr4介导的HR分析 | 第95页 |
| 2.2.8.2 Xoo介导的HR分析 | 第95页 |
| 2.2.8.3 烟草野火病菌接种分析 | 第95-96页 |
| 2.2.8.4 核盘菌接种分析 | 第96页 |
| 2.2.8.5 瓜果腐霉接种分析 | 第96页 |
| 2.2.8.6 TMV和CMV接种分析 | 第96页 |
| 2.2.8.7 根结线虫接种分析 | 第96-97页 |
| 2.2.8.8 耐盐胁迫分析 | 第97页 |
| 3 结果与分析 | 第97-111页 |
| 3.1 SlASN2转基因烟草植株的获得 | 第97-98页 |
| 3.2 SlASN2转基因烟草植株的鉴定 | 第98-99页 |
| 3.3 转基因烟草T0代植株SlASN2表达量检测 | 第99-100页 |
| 3.4 SlASN2转基因烟草植株的生长发育情况 | 第100-101页 |
| 3.5 SlASN2转基因烟草T1代种子遗传分离比 | 第101-102页 |
| 3.6 SlASN2转基因烟草的抗病功能分析 | 第102-111页 |
| 3.6.1 SlASN2对Cf-4/Avr4介导的过敏性坏死反应的调控作用 | 第102页 |
| 3.6.2 SlASN2对Xoo介导的过敏性坏死反应的调控作用 | 第102-103页 |
| 3.6.3 SlASN2对野火病菌Pstab的抗病调控作用 | 第103-104页 |
| 3.6.4 SlASN2对核盘菌的抗病调控作用 | 第104-105页 |
| 3.6.5 SlASN2对瓜果腐霉的抗病调控作用 | 第105-106页 |
| 3.6.6 SlASN2对TMV和CMV的抗病调控作用 | 第106-107页 |
| 3.6.7 SlASN2对南方根结线虫的抗病调控作用 | 第107-108页 |
| 3.6.8 SlASN2转基因植株接种核盘菌后防卫相关基因的表达 | 第108-109页 |
| 3.6.9 SlASN2对高盐胁迫的调控作用 | 第109-111页 |
| 4 结论 | 第111-113页 |
| 5 讨论 | 第113-117页 |
| 5.1 转基因中影响转化效率的主要因素 | 第113-114页 |
| 5.2 SlASN2基因对植物生长发育的调控 | 第114-115页 |
| 5.3 SlASN2基因对植物抗病性的调控作用 | 第115页 |
| 5.4 SlASN2在抗逆中的调控作用 | 第115-117页 |
| 第五章 OsASN转基因水稻的筛选鉴定与生长特性分析 | 第117-132页 |
| 1 前言 | 第117页 |
| 2 材料与方法 | 第117-119页 |
| 2.1 材料 | 第117-118页 |
| 2.1.1 供试植株 | 第117-118页 |
| 2.1.2 供试试剂 | 第118页 |
| 2.2 研究方法 | 第118-119页 |
| 2.2.1 T4代OsASN超表达转基因水稻植株的GUS染色鉴定 | 第118页 |
| 2.2.2 T4代OsASN转基因水稻植株的潮霉素鉴定 | 第118-119页 |
| 2.2.3 T4代OsASN转基因水稻的生长特性分析 | 第119页 |
| 3 结果与分析 | 第119-130页 |
| 3.1 OsASN转基因水稻T4代种子的GUS染色分析 | 第119-124页 |
| 3.2 OsASN转基因水稻T4代植株潮霉素抗性鉴定分析 | 第124-125页 |
| 3.3 OsASN转基因水稻T4代植株生长特性分析 | 第125-130页 |
| 5 讨论 | 第130-132页 |
| 全文小结 | 第132-136页 |
| 参考文献 | 第136-140页 |
| 附表1 本论文所用缩写词及中英文对照 | 第140-142页 |
| 附表2 常用培养基配方 | 第142-146页 |
| 附表3 所用主要化学试剂及缓冲液配方 | 第146页 |
