| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 术语及符号说明 | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-26页 |
| 1.1 糖苷水解酶 | 第10页 |
| 1.2 果聚糖和果聚糖酶的研究进展 | 第10-19页 |
| 1.2.1 果聚糖 | 第10-12页 |
| 1.2.2 果聚糖酶的分类及来源 | 第12-13页 |
| 1.2.3 果聚糖酶的结构与功能 | 第13-16页 |
| 1.2.4 果聚糖酶的催化机制 | 第16-17页 |
| 1.2.5 果聚糖酶的酶活测定方法介绍 | 第17页 |
| 1.2.6 果聚糖酶的应用 | 第17-19页 |
| 1.3 蔗糖和蔗糖酶的研究进展 | 第19-25页 |
| 1.3.1 蔗糖 | 第19-20页 |
| 1.3.2 蔗糖酶的分类及来源 | 第20页 |
| 1.3.3 蔗糖酶的结构与功能 | 第20-22页 |
| 1.3.4 蔗糖酶的催化机制 | 第22-23页 |
| 1.3.5 蔗糖酶的酶活测定方法 | 第23-24页 |
| 1.3.6 蔗糖酶的应用 | 第24-25页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第25页 |
| 1.5 研究内容 | 第25-26页 |
| 第2章 重组果聚糖酶及蔗糖酶的基因表达、纯化及酶学性质 | 第26-77页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.4 常用溶液 | 第27-28页 |
| 2.1.5 常用培养基 | 第28页 |
| 2.1.6 DNA 测序与引物合成 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-40页 |
| 2.2.1 序列分析 | 第29页 |
| 2.2.2 原核表达载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.3 重组质粒的转化 | 第32页 |
| 2.2.4 重组酶在大肠杆菌中的诱导表达 | 第32-33页 |
| 2.2.5 重组酶的纯化和鉴定 | 第33-35页 |
| 2.2.6 果聚糖酶及蔗糖酶酶活的测定方法 | 第35页 |
| 2.2.7 重组酶的酶学性质研究 | 第35-40页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第40-70页 |
| 2.3.1 levAGN25 的序列分析 | 第40-44页 |
| 2.3.2 inuAJB13 的序列分析 | 第44-48页 |
| 2.3.3 sucAHJ14 的序列分析 | 第48-51页 |
| 2.3.4 重组酶 LevAGN25 的基因表达纯化及酶学性质研究 | 第51-57页 |
| 2.3.5 重组酶 InuAJB13 的基因表达纯化及酶学性质研究 | 第57-65页 |
| 2.3.6 重组酶 SucAHJ14 的基因表达纯化及酶学性质研究 | 第65-70页 |
| 2.4 讨论 | 第70-74页 |
| 2.5 本章小结 | 第74-77页 |
| 第3章 重组果聚糖酶催化残基的定点突变 | 第77-89页 |
| 3.1 实验材料 | 第77-78页 |
| 3.1.1 菌株 | 第77页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第77页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第77页 |
| 3.1.4 常用溶液 | 第77-78页 |
| 3.1.5 常用培养基 | 第78页 |
| 3.1.6 DNA 测序与引物合成 | 第78页 |
| 3.2 实验方法 | 第78-81页 |
| 3.2.1 重组果聚糖酶基因序列的突变位点分析 | 第78页 |
| 3.2.2 重组果聚糖酶基因的定点突变 | 第78-80页 |
| 3.2.3 突变型重组果聚糖酶的活性分析及水解产物分析 | 第80-81页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第81-86页 |
| 3.3.1 重组果聚糖酶基因序列的突变位点分析 | 第81页 |
| 3.3.2 重组果聚糖酶基因的定点突变 | 第81-84页 |
| 3.3.3 突变型重组果聚糖酶 LevAGN25 的活性分析 | 第84-85页 |
| 3.3.4 突变型重组果聚糖酶 InuAJB13 的活性分析及水解产物分析 | 第85-86页 |
| 3.4 讨论 | 第86-87页 |
| 3.5 本章小结 | 第87-89页 |
| 第4章 总结与展望 | 第89-93页 |
| 4.1 总结 | 第89-91页 |
| 4.2 创新 | 第91页 |
| 4.3 展望 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-98页 |
| 附录 | 第98-104页 |
| 附录A 实验中所使用的缓冲液的配置 | 第98-99页 |
| A1 不同 pH 值的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液的配制 | 第98页 |
| A2 不同 pH 值的甘氨酸-NaOH 缓冲液的配制 | 第98-99页 |
| 附录B 三个 GH32 家族糖苷水解酶基因序列及氨基酸序列 | 第99-103页 |
| B1 LevAGN25 的核苷酸序列 | 第99-100页 |
| B2 LevAGN25 的氨基酸序列 | 第100页 |
| B3 InuJB13 的核苷酸序列 | 第100-101页 |
| B4 InuJB13 的氨基酸序列 | 第101页 |
| B5 SucAHJ14 的核苷酸序列 | 第101-102页 |
| B6 SucAHJ14 的氨基酸序列 | 第102-103页 |
| 附录C 氨基酸中英文对照及缩写表 | 第103-104页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
