| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-28页 |
| 1.1 板栗疫病菌研究进展 | 第12-18页 |
| 1.1.1 板栗疫病菌的发现及概况 | 第12-13页 |
| 1.1.2 板栗疫病菌的防治 | 第13页 |
| 1.1.3 板栗疫病菌与低毒病毒 | 第13-14页 |
| 1.1.4 板栗疫病菌作为基因研究及病毒研究的模式丝状真菌 | 第14-15页 |
| 1.1.5 板栗疫病菌的致病因子 | 第15-18页 |
| 1.2 泛素化研究进展 | 第18-22页 |
| 1.2.1 泛素化简介 | 第18页 |
| 1.2.2 病毒与泛素化 | 第18-21页 |
| 1.2.3 聚泛素基因相关研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3 泛素化蛋白质组研究进展 | 第22-26页 |
| 1.3.1 泛素化研究的几个挑战 | 第22-23页 |
| 1.3.2 蛋白质水平富集并鉴定泛素化蛋白质组 | 第23-24页 |
| 1.3.3 肽段水平富集并鉴定泛素化蛋白质组 | 第24-25页 |
| 1.3.4 泛素化蛋白质组学的研究发展 | 第25-26页 |
| 1.4 本研究的主要内容和目的意义 | 第26-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-44页 |
| 2.1 材料及培养条件 | 第28-29页 |
| 2.1.1 细菌 | 第28页 |
| 2.1.2 真菌 | 第28-29页 |
| 2.1.3 质粒 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-44页 |
| 2.2.1 DNA扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.2 核酸纯化 | 第30-32页 |
| 2.2.3 重组质粒构建 | 第32-33页 |
| 2.2.4 板栗疫病菌转化 | 第33-34页 |
| 2.2.5 Southern杂交分析 | 第34-36页 |
| 2.2.6 板栗疫病菌突变体表型特征分析 | 第36-37页 |
| 2.2.7 菌丝融合传染低毒病毒 | 第37页 |
| 2.2.8 低毒病毒累积量检测 | 第37-38页 |
| 2.2.9 定量PCR分析 | 第38页 |
| 2.2.10 真菌总蛋白质样品的提取及蛋白质浓度测定 | 第38页 |
| 2.2.11 蛋白质浓度测定 | 第38-39页 |
| 2.2.12 SDS-PAGE检测及染色 | 第39-40页 |
| 2.2.13 蛋白质免疫印迹(Western blot) | 第40页 |
| 2.2.14 蛋白质酶解 | 第40-41页 |
| 2.2.15 泛素化肽段富集 | 第41页 |
| 2.2.16 酶解产物的LC MS/MS | 第41-42页 |
| 2.2.17 Maxquant的非标记分析 | 第42-43页 |
| 2.2.18 生物信息分析 | 第43-44页 |
| 第三章 板栗疫病菌聚泛素基因cpubi4的功能研究 | 第44-68页 |
| 3.1 板栗疫病菌的泛素基因 | 第44-49页 |
| 3.1.1 板栗疫病菌基因组中编码泛素的基因 | 第44-45页 |
| 3.1.2 泛素相关基因的保守序列分析 | 第45-47页 |
| 3.1.3 板栗疫病菌泛素相关基因在EP155和EP155/CHV1-EP713中的表达水平 | 第47-48页 |
| 3.1.4 板栗疫病菌cpubi4基因表达与温度压力的关系 | 第48-49页 |
| 3.2 板栗疫病菌cpubi4基因功能研究 | 第49-61页 |
| 3.2.1 板栗疫病菌cpubi4基因缺失突变体的构建 | 第49-50页 |
| 3.2.2 板栗疫病菌cpubi4基因缺失突变体验证 | 第50-51页 |
| 3.2.3 板栗疫病菌cpubi4基因缺失突变体表型观察 | 第51-52页 |
| 3.2.4 板栗疫病菌cpubi4基因缺失突变体产孢量分析 | 第52-53页 |
| 3.2.5 板栗疫病菌cpubi4基因缺失突变体致病力检测 | 第53-54页 |
| 3.2.6 板栗疫病菌cpubi4基因缺失突变体互补菌株构建 | 第54-56页 |
| 3.2.7 板栗疫病菌cpubi4基因缺失突变体是否影响病毒复制 | 第56-57页 |
| 3.2.8 板栗疫病菌cpubi4基因缺失突变体温度压力实验 | 第57-58页 |
| 3.2.9 板栗疫病菌cpubi4基因缺失突变影响了泛素化的程度 | 第58-60页 |
| 3.2.10 板栗疫病菌cpubi4基因缺失引起总蛋白质的累积 | 第60-61页 |
| 3.3 板栗疫病菌cpubi4基因所编码c末端氨基酸功能 | 第61-64页 |
| 3.3.1 不同真菌的聚泛素基因的所编码的c端氨基酸 | 第61-62页 |
| 3.3.2 板栗疫病菌聚泛素基因cpubi4所编码的c端氨基酸突变 | 第62-64页 |
| 3.3.3 cpubi4所编码的c端氨基酸突变菌株表型及致病力分析 | 第64页 |
| 3.4 讨论 | 第64-68页 |
| 第四章 板栗疫病菌泛素化蛋白质谱构建 | 第68-77页 |
| 4.1 引言 | 第68页 |
| 4.2 板栗疫病菌泛素化蛋白质表达谱的构建 | 第68-73页 |
| 4.2.1 板栗疫病菌泛素化蛋白质表达谱的构建策略 | 第68-69页 |
| 4.2.2 板栗疫病菌蛋白质泛素化位点数量分布 | 第69-70页 |
| 4.2.3 板栗疫病菌泛素化蛋白质组的GO分类 | 第70-72页 |
| 4.2.4 板栗疫病菌泛素化蛋白质的KEGG分类 | 第72页 |
| 4.2.5 板栗疫病菌的泛素化肽段基序分析 | 第72-73页 |
| 4.3 讨论 | 第73-77页 |
| 4.3.1 板栗疫病菌泛素化蛋白质组研究策略的选择 | 第73-74页 |
| 4.3.2 板栗疫病菌泛素化蛋白质组中蛋白质酶体相关蛋白质高度泛素化 | 第74-75页 |
| 4.3.3 板栗疫病菌泛素化蛋白质组中与致病力相关蛋白质 | 第75页 |
| 4.3.4 板栗疫病菌泛素化肽段基序与其他物种的差异 | 第75-77页 |
| 第五章 板栗疫病菌cpubi4基因调控的泛素化组及蛋白质组研究 | 第77-100页 |
| 引言 | 第77页 |
| 5.1 差异泛素化组及蛋白质组研究策略 | 第77-79页 |
| 5.2 cpubi4基因缺失突变体泛素化组研究 | 第79-86页 |
| 5.2.1 cpubi4基因缺失突变体泛素化水平差异分析 | 第79-81页 |
| 5.2.2 泛素化水平显著差异蛋白质的KEGG分析 | 第81-82页 |
| 5.2.3 泛素化水平显著差异蛋白质的GO分析 | 第82-86页 |
| 5.3 cpubi4基因缺失突变体蛋白质组研究 | 第86-88页 |
| 5.3.1 cpubi4基因缺失突变体蛋白质组水平差异分析 | 第86-87页 |
| 5.3.2 蛋白质组水平显著差异蛋白质KEGG分析 | 第87-88页 |
| 5.4 cpubi4基因缺失突变体泛素化组及蛋白质组关联分析 | 第88-91页 |
| 5.5 讨论 | 第91-100页 |
| 5.5.1 cpubi4基因在蛋白质代谢上的影响 | 第92-94页 |
| 5.5.2 cpubi4基因在MAPK通路的影响 | 第94-98页 |
| 5.5.3 蛋白质组与泛素化组的相关性 | 第98-100页 |
| 第六章 结论与展望 | 第100-102页 |
| 6.1 结论 | 第100-101页 |
| 6.2 有待进一步研究的科学问题 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-114页 |
| 附录 | 第114-158页 |
| 附录1 本实验涉及的培养基和相关溶液配制 | 第114-117页 |
| 附录2 抗生素配制及其使用浓度 | 第117-118页 |
| 附录3 实验中所用到的引物 | 第118-120页 |
| 附录4 △cpubi4与DK80之间差异表达的泛素化肽段 | 第120-158页 |
| 致谢 | 第158-159页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第159页 |
