| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第14-22页 |
| 1.1 引言 | 第14-15页 |
| 1.2 农、林废弃物的结构组成 | 第15-18页 |
| 1.2.1 纤维素 | 第15-16页 |
| 1.2.2 半纤维素 | 第16页 |
| 1.2.2.1 甘露聚糖 | 第16页 |
| 1.2.3 木质素 | 第16-17页 |
| 1.2.4 果胶 | 第17-18页 |
| 1.3 农、林废弃物的生物降解 | 第18-19页 |
| 1.3.1 纤维素酶 | 第18页 |
| 1.3.2 甘露聚糖酶 | 第18-19页 |
| 1.3.3 果胶酶 | 第19页 |
| 1.4 研究现状 | 第19-21页 |
| 1.5 研究意义 | 第21-22页 |
| 2 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1 主要化学试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 实验所用主要溶液 | 第23-24页 |
| 2.3 主要培养基 | 第24页 |
| 2.4 主要仪器和设备 | 第24-25页 |
| 2.5 试剂盒及工具酶 | 第25-26页 |
| 3 实验方法 | 第26-38页 |
| 3.1 糖苷酶目的基因与高表达菌株的获取 | 第26页 |
| 3.2 重组表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 3.2.1 pJL-14重组表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 3.2.2 pJL-36重组表达载体的构建 | 第27页 |
| 3.3 感受态细胞制备 | 第27-28页 |
| 3.3.1 大肠杆菌(E.coli)DH5α与BL21(DE3)感受态制备 | 第27-28页 |
| 3.3.2 毕赤酵母(Pichiamethanolica)感受态制备 | 第28页 |
| 3.4 糖苷酶重组表达载体的转化 | 第28-29页 |
| 3.4.1 pJL-14重组表达载体的转化 | 第28-29页 |
| 3.4.2 pJL-36重组表达载体的转化 | 第29页 |
| 3.5 菌落PCR | 第29-30页 |
| 3.6 糖苷酶的表达 | 第30-31页 |
| 3.6.1 糖苷酶在大肠杆菌中的表达 | 第30-31页 |
| 3.6.2 糖苷酶在毕赤酵母中的表达 | 第31页 |
| 3.6.3 糖苷酶在发酵罐中的诱导表达 | 第31页 |
| 3.7 目的蛋白的获取 | 第31-32页 |
| 3.7.1 大肠杆菌BL21(DE3)中表达的目的蛋白的获取 | 第31-32页 |
| 3.7.2 毕赤酵母GS115表达的目的蛋白的获取 | 第32页 |
| 3.8 OD_(600nm)及细胞湿重的测定 | 第32-33页 |
| 3.9 蛋白定量方法(Bradford法) | 第33页 |
| 3.9.1 蛋白标准曲线的制作 | 第33页 |
| 3.9.2 蛋白样品浓度测定 | 第33页 |
| 3.10 DNS法测定还原糖 | 第33-34页 |
| 3.10.1 标准曲线的制作 | 第33-34页 |
| 3.10.1.1 葡萄糖标准曲线的制作 | 第33-34页 |
| 3.10.1.2 甘露糖标准曲线的制作 | 第34页 |
| 3.10.1.3 半乳糖醛酸标准曲线的制作 | 第34页 |
| 3.10.2 糖苷酶的酶活测定方法 | 第34页 |
| 3.11 蛋白分子量的检测方法 | 第34-35页 |
| 3.12 温度、pH值及金属离子对糖苷酶酶活的影响 | 第35-36页 |
| 3.12.1 糖苷酶最适反应pH值的确定 | 第35-36页 |
| 3.12.2 糖苷酶pH稳定性测定 | 第36页 |
| 3.12.3 糖苷酶最适反应温度的确定 | 第36页 |
| 3.12.4 糖苷酶热稳定性测定 | 第36页 |
| 3.12.5 金属离子对糖苷酶的影响 | 第36页 |
| 3.13 酶动力学常数测定 | 第36-38页 |
| 4 实验结果 | 第38-56页 |
| 4.1 标准曲线制作结果 | 第38-40页 |
| 4.1.1 BSA标准曲线制作结果 | 第38页 |
| 4.1.2 葡萄糖标准曲线制作结果 | 第38-39页 |
| 4.1.3 甘露糖标准曲线制作结果 | 第39页 |
| 4.1.4 半乳糖醛酸标准曲线制作结果 | 第39-40页 |
| 4.2 pJL-14的实验结果 | 第40-43页 |
| 4.2.1 pJL-14的序列优化结果 | 第40-41页 |
| 4.2.2 pJL-14的蛋白电泳结果 | 第41页 |
| 4.2.3 pJL-14的酶学性质表征结果 | 第41-43页 |
| 4.2.3.1 pJL-14的最适反应pH值及pH稳定性 | 第41-42页 |
| 4.2.3.2 pJL-14的最适反应温度值及热稳定性 | 第42页 |
| 4.2.3.3 二价金属离子对pJL-14的酶活影响 | 第42-43页 |
| 4.2.3.4 pJL-14的Km测定结果 | 第43页 |
| 4.3 pJL-36的实验结果 | 第43-47页 |
| 4.3.1 pJL-36的序列来源及优化结果 | 第43-44页 |
| 4.3.2 pJL-36转化株的菌落PCR | 第44-45页 |
| 4.3.3 pJL-36的蛋白电泳结果 | 第45页 |
| 4.3.4 pJL-36的酶学性质表征结果 | 第45-47页 |
| 4.3.4.1 pJL-36的最适反应pH值及pH稳定性 | 第45-46页 |
| 4.3.4.2 pJL-36的最适反应温度值及热稳定性 | 第46页 |
| 4.3.4.3 二价金属离子对pJL-36的酶活影响 | 第46-47页 |
| 4.3.4.4 pJL-36的Km测定结果 | 第47页 |
| 4.4 C6的实验结果 | 第47-50页 |
| 4.4.1 C6蛋白的摇瓶表达 | 第47-48页 |
| 4.4.2 C6蛋白的发酵罐表达 | 第48页 |
| 4.4.3 C6的酶学性质表征结果 | 第48-50页 |
| 4.4.3.1 C6的最适反应pH值及pH稳定性 | 第48-49页 |
| 4.4.3.2 C6的最适反应温度值及热稳定性 | 第49页 |
| 4.4.3.3 二价金属离子对C6的酶活影响 | 第49-50页 |
| 4.5 A10的实验结果 | 第50-52页 |
| 4.5.1 A10蛋白的摇瓶表达 | 第50页 |
| 4.5.2 A10蛋白的发酵罐表达 | 第50-51页 |
| 4.5.3 A10的酶学性质表征结果 | 第51-52页 |
| 4.5.3.1 A10的最适反应pH值及pH稳定性 | 第51-52页 |
| 4.5.3.2 A10的最适反应温度值及热稳定性 | 第52页 |
| 4.5.3.3 二价金属离子对A10的酶活影响 | 第52页 |
| 4.6 pJL-44的实验结果 | 第52-56页 |
| 4.6.1 pJL-44蛋白的表达 | 第52-53页 |
| 4.6.2 pJL-44的酶学性质表征结果 | 第53-56页 |
| 4.6.2.1 pJL-44的最适反应pH值及pH稳定性 | 第53页 |
| 4.6.2.2 pJL-44的最适反应温度值及热稳定性 | 第53-54页 |
| 4.6.2.3 二价金属离子对pJL-44的酶活影响 | 第54页 |
| 4.6.2.4 pJL-44的Km测定结果 | 第54-56页 |
| 5 结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 在校期间科研成果 | 第67页 |
