个人简历 | 第3-7页 |
缩略词表 | 第7-9页 |
摘要 | 第9-12页 |
Abstract | 第12-15页 |
前言 | 第16-21页 |
1 材料与方法 | 第21-34页 |
1.1 材料 | 第21-23页 |
1.2 外周血单个核细胞分离 | 第23页 |
1.3 细胞共培养 | 第23页 |
1.4 PCR检测基因组DNA中PERV的存在情况 | 第23-25页 |
1.4.1 TRIzol法提DNA | 第23-24页 |
1.4.2 PCR检测PBMC去除情况 | 第24页 |
1.4.3 PCR检测PERV的存在情况 | 第24-25页 |
1.5 RT-PCR检测mRNA中PERV的表达情况 | 第25-26页 |
1.5.1 TRIzol法提RNA | 第25-26页 |
1.5.2 RT-PCR检测PERV的表达情况 | 第26页 |
1.6 反转录酶活性检测 | 第26-28页 |
1.7 无PERV传染性猪全基因组重测序鉴定 | 第28-29页 |
1.8 带有N碱基的pol序列基因克隆与序列分析 | 第29-34页 |
1.8.1 引物设计与合成 | 第29-30页 |
1.8.2 提取PBMC基因组DNA | 第30页 |
1.8.3 PCR扩增及产物末端加“A”尾 | 第30-31页 |
1.8.4 目的片段回收与纯化 | 第31-32页 |
1.8.5 PERV-640pol基因与pMD-18T载体连接 | 第32页 |
1.8.6 转化 | 第32页 |
1.8.7 菌落PCR筛选 | 第32页 |
1.8.8 重组质粒酶切鉴定 | 第32-33页 |
1.8.9 序列分析 | 第33-34页 |
2 结果 | 第34-47页 |
2.1 无PERV传染性猪的初步筛选结果 | 第34-36页 |
2.1.1 PCR检测PBMC残留情况 | 第34页 |
2.1.2 RT-PCR检测PERV的表达情况 | 第34-36页 |
2.2 无PERV传染性猪的确证实验结果 | 第36-38页 |
2.2.1 PCR检测PERV的存在情况 | 第36页 |
2.2.2 RT-PCR检测PERV的表达情况 | 第36-37页 |
2.2.3 反转录酶活性检测结果 | 第37-38页 |
2.3 全基因组序列分析与鉴定 | 第38-44页 |
2.3.1 质量控制的结果与分析 | 第38-40页 |
2.3.2 测序结果数据统计 | 第40页 |
2.3.3 与参考基因组比对结果统计 | 第40-41页 |
2.3.4 变异信息注释结果统计 | 第41页 |
2.3.5 分析WZSP452中PERV-pol基因情况 | 第41-42页 |
2.3.6 WZSP452与其它猪PERV-pol基因比较 | 第42-43页 |
2.3.7 对WZSP452中PERV长片段进行分析 | 第43-44页 |
2.4 带有N碱基的pol序列基因克隆与序列分析结果 | 第44-47页 |
2.4.1 PCR扩增结果 | 第44页 |
2.4.2 菌落PCR筛选 | 第44-45页 |
2.4.3 双酶切鉴定 | 第45-46页 |
2.4.4 序列分析 | 第46-47页 |
3 讨论 | 第47-52页 |
结论 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-65页 |
综述:异种移植中猪内源性反转录病毒感染控制的研究进展 | 第65-78页 |
参考文献 | 第73-78页 |
致谢 | 第78-80页 |
攻读学位期间发表的学位论文 | 第80-81页 |
附件 | 第81-87页 |