| 英文缩写符号及中英文对照表 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第14-22页 |
| 1.1 植原体病害的发病机制 | 第14-17页 |
| 1.2 植物韧皮部 RNAs 的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3 植物韧皮部汁液蛋白的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-37页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第22页 |
| 2.1.3 试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 PCR 引物 | 第22-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-37页 |
| 2.2.1 桑树黄化型萎缩病植原体的检测 | 第24-26页 |
| 2.2.1.1 桑树黄化型萎缩病病株透射电镜检测 | 第24页 |
| 2.2.1.2 桑树黄化型萎缩病植原体的 PCR 检测 | 第24-26页 |
| 2.2.2 桑树韧皮部汁液的收集及 RNA 的提取和纯化 | 第26页 |
| 2.2.3 桑树韧皮部汁液 RNA 测序文库的构建和 Solexa 测序分析 | 第26-29页 |
| 2.2.3.1 RNA 测序文库的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.3.2 RNA 测序文库的 Solexa 测序及分析 | 第27页 |
| 2.2.3.3 基因注释 | 第27页 |
| 2.2.3.4 基因差异表达分析 | 第27-28页 |
| 2.2.3.5 差异表达基因的差异显著性验证 | 第28-29页 |
| 2.2.3.6 差异基因的生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.2.4 桑树韧皮部汁液植原体响应基因 MLX56 的克隆及生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.2.4.1 cDNA 合成 | 第29页 |
| 2.2.4.2 PCR 扩增 | 第29页 |
| 2.2.4.3 目的片段回收、连接和转化 | 第29页 |
| 2.2.4.4 序列测定 | 第29页 |
| 2.2.4.5 桑树韧皮部汁液 MLX56 基因的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.2.5 MLX56 基因的生物学功能分析 | 第30-33页 |
| 2.2.5.1 MLX56 植物表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.5.2 农杆菌 GV3101 感受态细胞制备及转化 | 第31页 |
| 2.2.5.3 拟南芥的转化 | 第31-32页 |
| 2.2.5.4 拟南芥基因组 DNA 的提取 | 第32页 |
| 2.2.5.5 转基因植株的 PCR 鉴定 | 第32页 |
| 2.2.5.6 转基因植株的抗蚜虫性能分析 | 第32页 |
| 2.2.5.7 转基因植株的抗病性分析 | 第32-33页 |
| 2.2.5.8 转基因植株的抗机械损伤能力分析 | 第33页 |
| 2.2.6 MLX56 基因启动子的克隆 | 第33-34页 |
| 2.2.6.1 Tail-PCR 扩增 | 第33-34页 |
| 2.2.6.2 启动子序列分析 | 第34页 |
| 2.2.7 MPp 的表达特性分析 | 第34-36页 |
| 2.2.7.1 MPp 植物表达载体的构建与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.7.2 MPp 的瞬时表达分析 | 第35页 |
| 2.2.7.3 MPp 的稳定表达分析 | 第35-36页 |
| 2.2.8 MPp 缺失植物表达载体的构建与鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.8.1 MPp 缺失植物表达载体的构建与鉴定 | 第36页 |
| 2.2.8.2 MPp 缺失片段转基因拟南芥的验证 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-72页 |
| 3.1 桑树黄化型萎缩病的确认 | 第37-38页 |
| 3.2 韧皮部汁液的纯度及提取 RNA 质量的检测 | 第38-39页 |
| 3.3 桑树韧皮部汁液植原体响应基因的表达谱分析 | 第39-56页 |
| 3.3.1 测序质量评估 | 第39-40页 |
| 3.3.2 测序文库 clean tag 的基因注释 | 第40页 |
| 3.3.3 健康和感病桑树韧皮部汁液 mRNAs 表达差异分析 | 第40-42页 |
| 3.3.3.1 健康和感病桑树韧皮部汁液 mRNAs 表达标准化分析 | 第40-41页 |
| 3.3.3.2 健康和感病桑树韧皮部汁液 mRNAs 表达差异显著性验证 | 第41-42页 |
| 3.3.4 差异表达基因的分类 | 第42-43页 |
| 3.3.5 差异表达基因的代谢和调节通路分析 | 第43-56页 |
| 3.4 桑树韧皮部汁液植原体响应基因 MLX56 的克隆及生物信息学分析 | 第56-59页 |
| 3.4.1 MLX56 基因的克隆 | 第56-57页 |
| 3.4.2 MLX56 基因结构分析 | 第57-58页 |
| 3.4.3 MLX56 基因编码蛋白的特性分析 | 第58-59页 |
| 3.5 桑树 MLX56 基因的生物学功能分析 | 第59-64页 |
| 3.5.1 MLX56 植物表达载体的构建与鉴定 | 第59-60页 |
| 3.5.2 转基因拟南芥的获得及验证 | 第60-61页 |
| 3.5.3 转基因拟南芥的表型分析 | 第61页 |
| 3.5.4 桑树 MLX56 基因影响植物对蚜虫的抗性 | 第61-62页 |
| 3.5.5 桑树 MLX56 基因影响植物对 Pst DC3000 的抗病性 | 第62-64页 |
| 3.5.6 机械损伤对转基因拟南芥的影响 | 第64页 |
| 3.6 MLX56 启动子序列的克隆 | 第64-72页 |
| 3.6.1 MLX56 启动子的克隆 | 第64-65页 |
| 3.6.2 MPp 启动子的序列分析 | 第65-68页 |
| 3.6.3 MPp 植物表达载体的构建 | 第68页 |
| 3.6.4 MPp 的表达特性分析 | 第68-69页 |
| 3.6.5 MPp 缺失植物表达载体的构建 | 第69-72页 |
| 3.6.5.1 MPp 缺失片段的克隆 | 第69-70页 |
| 3.6.5.2 MPp 缺失片段植物表达载体的构建 | 第70页 |
| 3.6.5.3 MPp 转基因拟南芥的验证 | 第70-72页 |
| 4 讨论 | 第72-78页 |
| 4.1 桑树韧皮部汁液 mRNAs 的复杂性 | 第72页 |
| 4.2 植原体侵染会紊乱桑树体内的代谢和激素平衡 | 第72-74页 |
| 4.3 桑树对植原体侵染的响应涉及多个信号传导过程 | 第74-75页 |
| 4.4 桑树韧皮部汁液蛋白 MLX56 具有多种生理功能 | 第75-76页 |
| 4.5 MPp 启动子的活性 | 第76-78页 |
| 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第92页 |
