| 中文摘要 | 第12-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 符号说明 | 第21-23页 |
| 第一章 绪论 | 第23-38页 |
| 1.1 本章引论 | 第23-25页 |
| 1.1.1 糖胺聚糖(GAG) | 第23-24页 |
| 1.1.2 糖胺聚糖的分类 | 第24-25页 |
| 1.2 硫酸软骨素 | 第25-31页 |
| 1.2.1 硫酸软骨素的结构和分类 | 第25-28页 |
| 1.2.2 硫酸软骨素生物学功能 | 第28-31页 |
| 1.3 硫酸软骨素降解酶(Chondroitinase,CSase) | 第31-35页 |
| 1.3.1 硫酸软骨素降解酶ABC(Chondroitinase ABC,CSase ABC) | 第33页 |
| 1.3.2 硫酸软骨素降解酶AC(Chondroitinase AC,CSase AC) | 第33-34页 |
| 1.3.3 硫酸软骨素降解酶B(Chondroitinase B,CSase B) | 第34页 |
| 1.3.4 降解硫酸软骨素的透明质酸酶 | 第34-35页 |
| 1.3.5 新型硫酸软骨素降解酶研究现状 | 第35页 |
| 1.4 选题意义 | 第35-38页 |
| 第二章 新型硫酸软骨素E (CS-nE)的提取和鉴定 | 第38-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 2.1.1 材料 | 第38页 |
| 2.1.2 试剂 | 第38-39页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-45页 |
| 2.2.1 CS-nE的提取 | 第39-40页 |
| 2.2.2 CS-nE的分级纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.3 CS-nE的分子量分析 | 第41页 |
| 2.2.4 CS-nE二糖组成的HPLC分析 | 第41-42页 |
| 2.2.5 CS-nE二糖组成的质谱分析 | 第42-43页 |
| 2.2.6 生物芯片的制备 | 第43-44页 |
| 2.2.7 CS-nE与蛋白的相互作用分析 | 第44-45页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第45-49页 |
| 2.3.1 CS-nE(Fr2M)的分子量 | 第45-46页 |
| 2.3.2 CS-nE(Fr2M)的二糖组成 | 第46页 |
| 2.3.3 CS-nE(Fr2M)的质谱分析 | 第46-47页 |
| 2.3.4 CS-nE(Fr2M)与生长因子和选择素的相互作用 | 第47-49页 |
| 2.4 本章小结 | 第49-52页 |
| 第三章 CS-E抗性糖胺聚糖裂解酶(HCLase Er)的鉴定与表达 | 第52-64页 |
| 3.1 实验材料 | 第52-56页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第52-53页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第53-55页 |
| 3.1.3 主要仪器与设备 | 第55-56页 |
| 3.1.4 软件工具和数据库 | 第56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-59页 |
| 3.2.1 HCLase Er基因和蛋白的序列分析 | 第56-57页 |
| 3.2.2 重组HCLase Er表达质粒的构建 | 第57-58页 |
| 3.2.3 重组HCLase Er蛋白的异源表达和纯化 | 第58-59页 |
| 3.3 实验结果 | 第59-62页 |
| 3.3.1 HCLase Er基因及蛋白序列 | 第59-61页 |
| 3.3.2 HCLase Er表达质粒的构建 | 第61页 |
| 3.3.3 重组HCLase Er的表达与纯化 | 第61-62页 |
| 3.4 本章小结 | 第62-64页 |
| 第四章 糖胺聚糖裂解酶HCLase Er的基本酶学性质和作用模式 | 第64-93页 |
| 4.1 实验材料 | 第64-65页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第64页 |
| 4.1.2 试剂 | 第64页 |
| 4.1.3 仪器与设备 | 第64-65页 |
| 4.2 实验方法 | 第65-74页 |
| 4.2.1 HCLase Er的底物特异性分析 | 第65页 |
| 4.2.2 HCLase Er的基本酶学性质分析 | 第65-66页 |
| 4.2.3 HCLase Er的酶活测定 | 第66-67页 |
| 4.2.4 HCLase Er内/外切活性分析 | 第67页 |
| 4.2.5 HCLase Er终产物的HPLC分析 | 第67-68页 |
| 4.2.6 HCLase Er终产物的质谱分析 | 第68-69页 |
| 4.2.7 HCLase Er降解高硫酸化度的商品化CS-E分析 | 第69-70页 |
| 4.2.8 HCLase Er降解CS-nE的分析 | 第70页 |
| 4.2.9 CS-nE寡糖的制备及其二糖组成分析 | 第70-71页 |
| 4.2.10 HCLase Er抗性四糖的酶解测序 | 第71-72页 |
| 4.2.11 HCLase Er抗性四糖的质谱分析 | 第72页 |
| 4.2.12 抗性四糖对HCLase Er酶活的影响 | 第72-73页 |
| 4.2.13 4-O-endosulfatase预处理抗性四糖对HCLase Er降解作用的影响 | 第73页 |
| 4.2.14 HCLase Er定点突变或冗余序列删除对酶活的影响 | 第73-74页 |
| 4.3 结果与分析 | 第74-90页 |
| 4.3.1 HCLase Er的底物特异性 | 第74页 |
| 4.3.2 HCLase Er的基本酶学性质 | 第74-76页 |
| 4.3.3 HCLase Er内切特征 | 第76-77页 |
| 4.3.4 HCLase Er降解HA/CS的终产物分析 | 第77-80页 |
| 4.3.5 HCLase Er难以降解高硫酸化度的商品化CS-E | 第80页 |
| 4.3.6 HCLase Er降解CS-nE的时间过程分析 | 第80-81页 |
| 4.3.7 HCLase Er抗性寡糖的二糖组成特征 | 第81-83页 |
| 4.3.8 HCLase Er抗性四糖序列和质谱分析 | 第83-86页 |
| 4.3.9 抗性四糖部分抑制了HCLase Er对HA和CS-A的降解 | 第86-87页 |
| 4.3.10 4-O-endosulfatase预处理促进了HCLase Er对抗性四糖的降解 | 第87-88页 |
| 4.3.11 HCLase Er突变及其对活性的影响 | 第88-90页 |
| 4.4 本章小结 | 第90-93页 |
| 第五章 重组HCLase Er的应用 | 第93-100页 |
| 5.1 实验材料 | 第93页 |
| 5.1.1 试剂 | 第93页 |
| 5.1.2 仪器设备 | 第93页 |
| 5.2 实验方法 | 第93-95页 |
| 5.2.1 利用HCLase Er降解CS-nE | 第93-94页 |
| 5.2.2 聚合度均一 CS-nE寡糖的大量制备 | 第94页 |
| 5.2.3 不同聚合度CS-nE寡糖的二糖组成分析 | 第94-95页 |
| 5.2.4 CS-nE寡糖抗肿瘤细胞转移活性的分析 | 第95页 |
| 5.3 实验结果 | 第95-98页 |
| 5.3.1 不同聚合度CS-nE寡糖的分析 | 第95-96页 |
| 5.3.2 CS-nE寡糖的二糖组成分析 | 第96-97页 |
| 5.3.3 CS-nE寡糖的抗肿瘤转移活性分析 | 第97-98页 |
| 5.4 本章小结 | 第98-100页 |
| 全文总结与展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 攻读博士学位期间参与的项目 | 第120-121页 |
| 博士期间发表论文及申请专利 | 第121-122页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第122页 |
