| 中文摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-23页 |
| 1.1 结核分枝杆菌重要转录调控因子 | 第10-13页 |
| 1.1.1 sigma因子 | 第11页 |
| 1.1.2 双组份系统 | 第11-12页 |
| 1.1.3 蛋白激酶 | 第12页 |
| 1.1.4 其他转录因子 | 第12-13页 |
| 1.2 whiB基因家族 | 第13-19页 |
| 1.2.1 whiB基因家族的研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.2 Mtb whiB家族成员whiB3的研究近况 | 第16-17页 |
| 1.2.3 whiB基因家族其他成员研究 | 第17-19页 |
| 1.3 结核分枝杆菌脂代谢相关重要基因 | 第19-20页 |
| 1.4 AT-hook蛋白相关研究进展 | 第20-21页 |
| 1.5 本课题提出的背景及意义 | 第21页 |
| 1.6 本课题的内容及研究目标 | 第21-23页 |
| 1.6.1 主要研究内容 | 第21-22页 |
| 1.6.2 研究目标 | 第22-23页 |
| 2 实验材料和方法 | 第23-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 抗生素及培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验所用质粒 | 第24页 |
| 2.1.4 酶,试剂和试剂盒 | 第24-25页 |
| 2.1.5 PCR反应引物,合成的片段及大小 | 第25页 |
| 2.1.6 缓冲液及试剂配制 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 分子生物学基本操作 | 第26-27页 |
| 2.2.2 细菌双杂交实验 | 第27页 |
| 2.2.3 单杂交筛选实验 | 第27-28页 |
| 2.2.4 His标签蛋白和GST标签蛋白的亲和纯化 | 第28-30页 |
| 2.2.4.1 表达载体的构建 | 第28页 |
| 2.2.4.2 IPTG诱导蛋白质表达 | 第28页 |
| 2.2.4.3 含有6×his融合标签蛋白的亲和纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.4.4 含有GST融合标签蛋白的亲和纯化 | 第29页 |
| 2.2.4.5 蛋白的透析 | 第29-30页 |
| 2.2.5 大分子相互作用检测 | 第30-31页 |
| 2.2.5.1 蛋白Pull-Down | 第30页 |
| 2.2.5.2 Western blotting检测 | 第30-31页 |
| 2.2.6 凝胶阻滞迁移分析(EMSA) | 第31-32页 |
| 2.2.6.1 琼脂糖凝胶EMSA | 第31页 |
| 2.2.6.2 同位素凝胶EMSA | 第31-32页 |
| 2.2.7 SPR实验 | 第32页 |
| 2.2.8 随机突变 | 第32-33页 |
| 2.2.9 功能互补实验 | 第33-34页 |
| 2.2.9.1 互补菌株及对照菌株的构建 | 第33页 |
| 2.2.9.2 胁迫条件下生长曲线的测定 | 第33-34页 |
| 2.2.10 染色质免疫沉淀法(Chromatin immunoprecitation,Ch-IP) | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-58页 |
| 3.1 WhiB3重要活性位点位于α螺旋区域和AT-hook中 | 第35-49页 |
| 3.1.1 构建whiB3的随机突变体库 | 第35-36页 |
| 3.1.2 单杂交筛选寻找whiB3的重要位点 | 第36-38页 |
| 3.1.3 WhiB3 97位甘氨酸突变后DNA结合活性消失 | 第38-41页 |
| 3.1.4 Mtb whiB3与MS whiB功能相关 | 第41-44页 |
| 3.1.4.1 MS-WhiB具有与Mtb-WhiB3类似的DNA结合活性 | 第41页 |
| 3.1.4.2 双杂交验证MtbwhiB3/MSwhiB和Rv3457c/MS1524相互作用 | 第41-44页 |
| 3.1.5 互补实验验证筛选位点的重要性 | 第44-49页 |
| 3.1.5.1 互补菌株的构建 | 第44-45页 |
| 3.1.5.2 功能互补实验 | 第45-49页 |
| 3.2 WhiB3与众多功能基因存在相互作用 | 第49-58页 |
| 3.2.1 双杂交筛选寻找与WhiB3互作的基因 | 第49-50页 |
| 3.2.2 体外实验证明筛选得到的蛋白互作可靠 | 第50页 |
| 3.2.2.1 互作基因与WhiB3的体内共表达 | 第50页 |
| 3.2.2.2 Western Blotting检验体内Pull-down | 第50页 |
| 3.2.3 SPR(表面等离子共振)验证相互作用 | 第50-52页 |
| 3.2.4 WhiB3与Mtb RNA聚合酶α亚基存在相互作用 | 第52-58页 |
| 4 总结与讨论 | 第58-63页 |
| 4.1 总结 | 第58页 |
| 4.2 讨论 | 第58-63页 |
| 4.2.1 Mtb WhiB家族的DNA结合功能 | 第58-59页 |
| 4.2.2 Mtb WhiB3的重要活性位点 | 第59-60页 |
| 4.2.3 WhiB3与其他蛋白的相互作用 | 第60-61页 |
| 4.2.4 WhiB3与抗氧化胁迫 | 第61页 |
| 4.2.5 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 附录 | 第74-81页 |
