| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 縮略语说明 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 研究现状、成果 | 第11-12页 |
| 研究目的、方法 | 第12-14页 |
| 一、尿道致病性大肠杆菌新基因R049的定位研究 | 第14-45页 |
| 1.1 对象和方法 | 第14-26页 |
| 1.1.1 菌株及培养基 | 第15页 |
| 1.1.2 主要试剂、仪器及软件 | 第15-16页 |
| 1.1.3 UPEC132菌株鉴定 | 第16-17页 |
| 1.1.4 染色体DNA的制备 | 第17-18页 |
| 1.1.5 构建染色体DNA文库 | 第18-22页 |
| 1.1.6 DNA文库emPCR | 第22-24页 |
| 1.1.7 测序和数据初步处理 | 第24-25页 |
| 1.1.8 生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 1.2 结果 | 第26-39页 |
| 1.2.1 UPEC132菌株鉴定结果 | 第26-27页 |
| 1.2.2 细菌染色体DNA制备 | 第27页 |
| 1.2.3 单链DNA文库的构建 | 第27-32页 |
| 1.2.4 emPCR结果 | 第32-35页 |
| 1.2.5 焦磷酸法测序结果 | 第35页 |
| 1.2.6 R049基因的染色体定位 | 第35-39页 |
| 1.3 讨论 | 第39-43页 |
| 1.3.1 基因组测序方法 | 第39-41页 |
| 1.3.2 微生物基因组计划 | 第41页 |
| 1.3.3 R049基因的染色体定位研究 | 第41-43页 |
| 1.4 小结 | 第43-45页 |
| 二、UPEC132的R049基因缺失株构建 | 第45-61页 |
| 2.1 对象和方法 | 第46-51页 |
| 2.1.1 菌株、质粒及培养基 | 第46页 |
| 2.1.2 主要试剂、仪器及软件 | 第46-47页 |
| 2.1.3 UPEC132药敏试验 | 第47页 |
| 2.1.4 PCR引物设计、反应体系及反应条件 | 第47-48页 |
| 2.1.5 质粒提取 | 第48-49页 |
| 2.1.6 质粒抗性改造 | 第49-51页 |
| 2.1.7 CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞与转化 | 第51页 |
| 2.1.8 大肠杆菌的感受态制备与电转化 | 第51页 |
| 2.2 结果 | 第51-57页 |
| 2.2.1 药敏试验结果 | 第52页 |
| 2.2.2 质粒pKD46-zeo和pCP20-zeo的获得 | 第52-53页 |
| 2.2.3 氯霉素抗性片段的制备 | 第53页 |
| 2.2.4 R049基因的置换 | 第53-54页 |
| 2.2.5 氯霉素抗性基因的消除 | 第54-55页 |
| 2.2.6 UPEC132ΔR049缺失株的鉴定 | 第55-57页 |
| 2.3 讨论 | 第57-60页 |
| 2.3.1 构建UPEC132ΔR049的意义 | 第57-58页 |
| 2.3.2 基因敲除及Red同源重组技术 | 第58-59页 |
| 2.3.3 多重耐药临床菌株的基因敲除 | 第59-60页 |
| 2.4 小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |