| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-31页 |
| 1.1 甘蔗花叶病国内外研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1.1 甘蔗花叶病发生 | 第13页 |
| 1.1.2 甘蔗花叶病危害 | 第13-14页 |
| 1.1.3 甘蔗花叶病病征 | 第14-15页 |
| 1.1.4 甘蔗花叶病毒结构 | 第15页 |
| 1.1.5 甘蔗花叶病毒分类 | 第15-16页 |
| 1.1.6 甘蔗花叶病毒基因组与功能 | 第16-17页 |
| 1.1.7 甘蔗花叶病毒HC-Pro基因与CP基因抗病性 | 第17-18页 |
| 1.2 甘蔗黄叶病国内外研究进展 | 第18-22页 |
| 1.2.1 甘蔗黄叶病发生 | 第18-19页 |
| 1.2.2 甘蔗黄叶病危害 | 第19页 |
| 1.2.3 甘蔗黄叶病病征 | 第19-20页 |
| 1.2.4 甘蔗黄叶病毒结构 | 第20页 |
| 1.2.5 甘蔗黄叶病毒分类 | 第20-21页 |
| 1.2.6 甘蔗黄叶病毒基因组与功能 | 第21-22页 |
| 1.2.7 甘蔗黄叶病毒CP基因抗病性 | 第22页 |
| 1.3 甘蔗抗病毒病育种方法 | 第22-25页 |
| 1.3.1 常规育种 | 第22-23页 |
| 1.3.2 分子育种 | 第23-25页 |
| 1.4 甘蔗遗传转化方法 | 第25-26页 |
| 1.4.1 农杆菌介导法 | 第25-26页 |
| 1.4.2 基因枪转化法 | 第26页 |
| 1.4.3 电击法 | 第26页 |
| 1.4.4 聚乙二醇(PEG)介导法 | 第26页 |
| 1.5 国内外植物RNA干扰转基因育种研究进展 | 第26-29页 |
| 1.5.1 RNAi原理及对植物抗病毒育种的特殊意义 | 第26-27页 |
| 1.5.2 植物RNA干扰片段的特点 | 第27页 |
| 1.5.3 植物dsRNA导入方法 | 第27-29页 |
| 1.6 目的和意义 | 第29页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第29页 |
| 1.6.2 研究意义 | 第29页 |
| 1.7 本研究的研究思路 | 第29-31页 |
| 2 实验材料与实验方法 | 第31-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第31-32页 |
| 2.1.2 植物受体材料 | 第32页 |
| 2.1.3 实验试剂与实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.1.4 培养基 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-52页 |
| 2.2.1 甘蔗花叶病毒序列比对与干扰序列 | 第34-35页 |
| 2.2.2 甘蔗黄叶病毒序列比对与干扰序列 | 第35页 |
| 2.2.3 RNAi表达载体构建 | 第35-37页 |
| 2.2.4 目的片段回收 | 第37-38页 |
| 2.2.5 酶切回收片段 | 第38-39页 |
| 2.2.6 双价目的片段酶连接 | 第39-40页 |
| 2.2.7 双价目的片段RNAi表达载体构建 | 第40-42页 |
| 2.2.8 农杆菌工程菌获得与鉴定 | 第42-44页 |
| 2.2.9 甘蔗愈伤诱导 | 第44页 |
| 2.2.10 受试品种抗生素G418筛选浓度测定 | 第44-45页 |
| 2.2.11 农杆菌介导转化 | 第45-46页 |
| 2.2.12 基因枪转化 | 第46-48页 |
| 2.2.13 甘蔗抗性幼苗的生根培养与炼苗 | 第48-49页 |
| 2.2.14 幼苗移栽 | 第49页 |
| 2.2.15 转基因植株分子检测 | 第49-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-89页 |
| 3.1 甘蔗花叶病毒分离物序列比对与干扰序列 | 第52-57页 |
| 3.1.1 甘蔗花叶病毒分离物序列比对 | 第52-56页 |
| 3.1.2 甘蔗花叶病毒干扰序列 | 第56-57页 |
| 3.2 甘蔗黄叶病毒序列比对与干扰序列 | 第57-60页 |
| 3.2.1 甘蔗黄叶病毒序列比对 | 第57-60页 |
| 3.2.2 甘蔗黄叶病毒干扰序列 | 第60页 |
| 3.3 RNAi表达载体构建 | 第60-74页 |
| 3.3.1 干扰序列引物设计 | 第60-61页 |
| 3.3.2 干扰序列的获得与克隆 | 第61-63页 |
| 3.3.3 目的片段回收 | 第63-64页 |
| 3.3.4 酶切回收片段 | 第64页 |
| 3.3.5 双价目的片段酶连接 | 第64-68页 |
| 3.3.6 双价目的片段RNAi表达载体构建过程 | 第68-70页 |
| 3.3.7 构建含有目的片段正反重复序列载体 | 第70-74页 |
| 3.4 农杆菌工程菌获得与鉴定 | 第74-75页 |
| 3.5 甘蔗愈伤诱导 | 第75页 |
| 3.6 受试品种抗生素G418筛选浓度测定 | 第75-77页 |
| 3.7 农杆菌介导抗性愈伤组织筛选与分化 | 第77页 |
| 3.8 基因枪轰击 | 第77-79页 |
| 3.8.1 基因盒的制备 | 第77-78页 |
| 3.8.2 微弹包被验证 | 第78页 |
| 3.8.3 抗性甘蔗愈伤组织筛选与分化 | 第78-79页 |
| 3.9 甘蔗抗性幼苗生根及炼苗 | 第79-80页 |
| 3.10 幼苗移栽 | 第80-81页 |
| 3.11 转基因植株检测 | 第81-89页 |
| 4 讨论 | 第89-91页 |
| 4.1 AS对农杆菌介导甘蔗遗传转化的作用 | 第89-90页 |
| 4.2 NPTII筛选抗生素对甘蔗抗性苗筛选的影响 | 第90页 |
| 4.3 微量碱裂解制备模板 | 第90-91页 |
| 5 结论 | 第91-92页 |
| 6 后续工作 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-102页 |
| 附录Ⅰ | 第102-103页 |
| 附录Ⅱ | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
