| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| 1.1 奶山羊乳房炎 | 第14-15页 |
| 1.2 乳腺免疫反应 | 第15-16页 |
| 1.3 TLR家族的免疫功能 | 第16-20页 |
| 1.3.1 TLR受体介导的信号通路 | 第17-18页 |
| 1.3.2 TLR4受体的功能以及在E.coli引起的乳房炎中发挥的作用 | 第18-20页 |
| 1.4 CD36的功能与作用 | 第20-24页 |
| 1.4.1 CD36功能及作用 | 第20-21页 |
| 1.4.2 CD36与动脉粥样硬化的关系 | 第21页 |
| 1.4.3 CD36在高血糖及糖尿病发病机理中的研究 | 第21-22页 |
| 1.4.4 CD36与长链脂肪酸转运 | 第22-23页 |
| 1.4.5 CD36的免疫功能 | 第23-24页 |
| 1.4.6 CD36与TLRs家族之间的关系 | 第24页 |
| 1.5 长链不饱和脂肪酸的功能（LC-PUFA）以及在炎症中的作用 | 第24-26页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第26-27页 |
| 第二章 CD36和TLR4在E.coli引起西农萨能奶山羊乳房炎中的作用 | 第27-35页 |
| 2.1 材料方法 | 第27-30页 |
| 2.1.1 主要仪器和试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.2 实验动物样品采集 | 第28页 |
| 2.1.3 组织总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.1.4 实时定量检测 | 第28页 |
| 2.1.5 组织学检测 | 第28-29页 |
| 2.1.6 蛋白的Western blotting检测 | 第29-30页 |
| 2.1.7 数据统计分析 | 第30页 |
| 2.2 结果与分析 | 第30-33页 |
| 2.2.1 CD36和TLR4的组织表达分析 | 第30-31页 |
| 2.2.2 E.coli引起的乳房炎的分离及鉴定以及组织形态学观察 | 第31-32页 |
| 2.2.3 对比正常乳腺组织和乳房炎组织中相关基因和蛋白的变化 | 第32-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-34页 |
| 2.3.1 E. coli引起的乳房炎的乳腺组织变化 | 第33-34页 |
| 2.3.2 在E. coli引起的乳房炎当中CD36和TLR4的作用及信号通路的激活 | 第34页 |
| 2.4 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 西农萨能羊CD36和TLR4基因的CDNA克隆及相关载体构建 | 第35-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第35-43页 |
| 3.1.1 试剂与仪器 | 第35-36页 |
| 3.1.2 实验动物及样品采集 | 第36页 |
| 3.1.3 奶山羊CD36和TLR4的引物设计及克隆 | 第36-38页 |
| 3.1.4 pAdTrack-CMV-CD36载体的构建与鉴定 | 第38-42页 |
| 3.1.5 CD36和TLR4的双分子荧光互补载体的构建与鉴定 | 第42-43页 |
| 3.1.6 pef-NEO-Myc-TLR4和pef-NEO-Flag-CD36载体构建与鉴定 | 第43页 |
| 3.1.7 数据统计分析 | 第43页 |
| 3.2 结果与分析 | 第43-50页 |
| 3.2.1 西农萨能羊CD36和TLR4基因的cDNA克隆 | 第43-45页 |
| 3.2.2 pAdTrack-CMV-CD36载体的构建与鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.3 pAd-CD36重组腺病毒的包装与扩增 | 第46-47页 |
| 3.2.4 Ad-CD36最佳感染复数MOI（Multiplicity Of Infection）的探索 | 第47页 |
| 3.2.5 Ad-CD36基因超表达效率的检测 | 第47-48页 |
| 3.2.6 pBiFC-VN155-CD36和pBiFC-VC155-TLR4载体构建与鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2.7 pef-NEO-Flag-CD36和pef-NEO-Myc-TLR4载体构建与鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3 讨论 | 第50-51页 |
| 3.3.1 腺病毒的构建及病毒的包装扩增和腺病毒超表达CD36的效果检测 | 第50-51页 |
| 3.3.2 双分子荧光互补技术BiFC的应用及超表达载体pef-NEO-Myc和pef-NEO-Flag载体构建 | 第51页 |
| 3.4 小结 | 第51-53页 |
| 第四章. CD36参与LPS刺激奶山羊乳腺细胞引起的炎症反应及下游信号通路的激活 | 第53-68页 |
| 4.1 材料方法 | 第53-57页 |
| 4.1.2 细胞培养及处理 | 第54-55页 |
| 4.1.3 细胞转染及双荧光素酶报告基因表达分析 | 第55-56页 |
| 4.1.4 细胞的蛋白和ELLISA检测 | 第56页 |
| 4.1.5 数据统计分析 | 第56-57页 |
| 4.2 结果与分析 | 第57-65页 |
| 4.2.1 CD36的小RNA干扰效果分析 | 第57页 |
| 4.2.2 不同剂量LPS对乳腺上皮细胞的影响以及对CD36和TLR4基因表达的影响 | 第57-60页 |
| 4.2.3 CD36介导乳腺上皮细胞在LPS诱导下的炎症反应并调节下游信号通路 | 第60-65页 |
| 4.3 讨论 | 第65-67页 |
| 4.3.1 不同剂量LPS对乳腺上皮细胞的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.2 CD36介导乳腺上皮细胞在LPS诱导下的炎症反应并调节下游信号通路 | 第66-67页 |
| 4.4 小结 | 第67-68页 |
| 第五章 在乳腺上皮细胞中CD36与TLR4相互作用介导E.coli的内化 | 第68-77页 |
| 5.1 材料与方法 | 第68-72页 |
| 5.1.1 主要仪器和试剂 | 第68页 |
| 5.1.2 细胞培养及处理 | 第68页 |
| 5.1.3 双分子荧光互补（BiFC）分析 | 第68-69页 |
| 5.1.4 免疫沉淀反应 | 第69-72页 |
| 5.1.5 抗生素保护试验（Antibiotic protection assay） | 第72页 |
| 5.1.6 数据统计分析 | 第72页 |
| 5.2 结果与分析 | 第72-76页 |
| 5.2.1 CD36与TLR4相互作用共同介导奶山羊乳腺上皮细胞对E.coli的内化 | 第72-74页 |
| 5.2.2 CD36与TLR4蛋白之间相互结合识别E.coli | 第74-75页 |
| 5.2.3 CD36在介导E.coli内化的过程中发挥着重要的作用 | 第75-76页 |
| 5.3 讨论 | 第76页 |
| 5.4 小结 | 第76-77页 |
| 第六章 多不饱和脂肪酸亚麻酸通过CD36抑制LPS诱导的炎症反应 | 第77-91页 |
| 6.1 材料与方法 | 第77-79页 |
| 6.1.1 试剂与仪器 | 第77-78页 |
| 6.1.2 Ad-CD36127-279重组腺病毒载体构建及超表达效果的检测 | 第78页 |
| 6.1.3 pef-NEO-Flag- CD36127-279的构建与鉴定 | 第78页 |
| 6.1.4 亚油酸和 -亚麻酸处理细胞 | 第78页 |
| 6.1.5 实时定量PCR检测 | 第78页 |
| 6.1.6 Western blotting检测 | 第78-79页 |
| 6.1.7 荧光素酶报告基因检测 | 第79页 |
| 6.1.8 免疫荧光检测技术 | 第79页 |
| 6.1.9 数据统计分析 | 第79页 |
| 6.2 结果与分析 | 第79-89页 |
| 6.2.1 Ad-CD36127-279重组腺病毒载体构建及超表达效果的检测 | 第79-81页 |
| 6.2.2 pef-NEO-Flag- CD36127-279的构建与鉴定 | 第81-82页 |
| 6.2.3 亚油酸（LA）和 γ-亚麻酸（GLA）在奶山羊乳腺上皮细胞中的抑炎效能 | 第82-84页 |
| 6.2.4 γ--亚麻（GLA）在奶山羊乳腺上皮细胞中可以通过CD36来调节LPS诱导的NF-??的活性 | 第84-87页 |
| 6.2.5 γ--亚麻酸（GLA）在奶山羊乳腺上皮细胞可以通过CD36下调由LPS引起的炎性因子的表达 | 第87-89页 |
| 6.3 讨论 | 第89-90页 |
| 6.4 小结 | 第90-91页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 创新点 | 第92-93页 |
| 存在问题及展望 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-107页 |
| 附录 | 第107-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 作者简介 | 第120页 |
