| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 异种肝移植研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 超急性免疫排斥反应 | 第12-14页 |
| 1.3 血小板减少症 | 第14-16页 |
| 1.4 基因组编辑技术 | 第16-21页 |
| 1.4.1 ZFN技术 | 第16-17页 |
| 1.4.2 TALEN技术 | 第17-19页 |
| 1.4.3 CRISPR/Cas9技术 | 第19-21页 |
| 1.5 本研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 2 TALEN介导的GGTA1基因敲除猪制备 | 第23-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 动物性材料 | 第23-24页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 实验耗材 | 第24页 |
| 2.1.4 实验仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.5 实验溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 TALEN载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.2 体外转录TALEN mRNA | 第27-29页 |
| 2.2.3 转染、筛选及单细胞克隆鉴定 | 第29-31页 |
| 2.2.4 GGTA1基因敲除仔猪鉴定 | 第31页 |
| 2.2.5 脱靶分析 | 第31-33页 |
| 2.2.6 流式细胞术检测仔猪α-Gal表位 | 第33页 |
| 2.2.7 血清裂解实验 | 第33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-40页 |
| 2.3.1 TALEN打靶载体的构建及基因突变效率检测 | 第33-34页 |
| 2.3.2 阳性单细胞克隆鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.3 基因敲除猪的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.4 脱靶分析 | 第36-39页 |
| 2.3.5 GGTA1敲除猪α-Gal表位检测 | 第39页 |
| 2.3.6 血清裂解反应 | 第39-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-43页 |
| 3 CRISPR/Cas9介导的ASGR1基因敲除猪制备 | 第43-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 3.1.1 动物性材料 | 第43页 |
| 3.1.2 质粒与菌株 | 第43-44页 |
| 3.1.3 实验试剂及溶液配制 | 第44页 |
| 3.1.4 实验耗材及主要仪器设备 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-48页 |
| 3.2.1 CRISPR/Cas9打靶载体的设计及构建 | 第44-46页 |
| 3.2.2 sgRNA基因突变效率检测 | 第46-47页 |
| 3.2.3 转染、筛选及单细胞克隆鉴定 | 第47页 |
| 3.2.4 基因敲除猪的鉴定 | 第47页 |
| 3.2.5 脱靶效应分析 | 第47-48页 |
| 3.2.6 Western Blot检测 | 第48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-53页 |
| 3.3.1 sgRNA打靶载体的构建及基因突变效率检测 | 第48-49页 |
| 3.3.2 阳性单细胞克隆鉴定 | 第49页 |
| 3.3.3 敲除猪的鉴定 | 第49-52页 |
| 3.3.4 脱靶分析 | 第52页 |
| 3.3.5 Western blot检测 | 第52-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-55页 |
| 4 全文结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第67-68页 |
