| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 p53蛋白 | 第11-12页 |
| 1.1.1 p53简介 | 第11页 |
| 1.1.2 p53相关基因网络 | 第11-12页 |
| 1.1.3 p53基因与癌症的关系 | 第12页 |
| 1.2 miRNA的发现、生物起源和机制 | 第12-13页 |
| 1.2.1 miRNA的发现 | 第12-13页 |
| 1.2.2 miRNA的生物起源 | 第13页 |
| 1.2.3 miRNA的作用机制 | 第13页 |
| 1.3 miRNA与p53的调控网络 | 第13-17页 |
| 1.3.1 miRNA调控p53信号通路 | 第13-15页 |
| 1.3.2 p53调控相关miRNA | 第15-17页 |
| 1.4 本课题的研究意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-29页 |
| 2.1 材料 | 第19页 |
| 2.1.1 细胞株与菌种 | 第19页 |
| 2.1.2 载体和工具酶 | 第19页 |
| 2.1.3 抗体 | 第19页 |
| 2.2 方法 | 第19-29页 |
| 2.2.1 NLP分析乳腺癌中p53与miRNA之间的联系 | 第19-21页 |
| 2.2.2 预测miRNA的靶基因 | 第21页 |
| 2.2.3 Gene ontology（GO）分析和KEGG信号通路分析 | 第21页 |
| 2.2.4 基因相互作用网络分析 | 第21页 |
| 2.2.5 构建miRNA靶位点表达质粒 | 第21-24页 |
| 2.2.6 细胞培养、转染和荧光素酶检测 | 第24页 |
| 2.2.7 蛋白质印迹（Western blotting） | 第24-25页 |
| 2.2.7.1 提取细胞总蛋白（6 孔板） | 第24-25页 |
| 2.2.7.2 Western-blotting | 第25页 |
| 2.2.8 在Hek293中过表达p53 | 第25-26页 |
| 2.2.9 RNA抽提与反转录 | 第26页 |
| 2.2.10 实时定量PCR检测mi RNA表达 | 第26页 |
| 2.2.11 构建干扰p53的MCF7稳定细胞株 | 第26-27页 |
| 2.2.12 小RNA测序 | 第27页 |
| 2.2.13 小RNA测序结果分析 | 第27-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-44页 |
| 3.1 乳腺癌中p53相关miRNA的文献挖掘及其靶基因的研究 | 第29-39页 |
| 3.1.1 乳腺癌中p53相关mi RNA的文献挖掘 | 第29-30页 |
| 3.1.2 乳腺癌中p53相关miRNA靶基因的预测 | 第30-32页 |
| 3.1.3 miR-21靶位点的实验验证 | 第32-34页 |
| 3.1.4 miRNA靶基因的Gene ontology分析 | 第34-36页 |
| 3.1.5 信号通路分析 | 第36-37页 |
| 3.1.6 miRNA靶基因的网络分析 | 第37-39页 |
| 3.2 乳腺癌细胞中p53调控的mi RNA的筛选和靶基因研究 | 第39-44页 |
| 3.2.1 乳腺癌细胞MCF-7 中筛选p53调控的miRNA | 第39-41页 |
| 3.2.2 在Hek293细胞中过表达p53对mi RNA表达的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.3 p53调控的mi RNA的靶基因预测和生物信息学分析 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 4.1 p53通过调控miRNA的转录，间接地调控细胞周期 | 第44-45页 |
| 4.2 p53通过调控miRNA的转录，间接地轴突导向信号通路 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
