| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第13-22页 |
| 1.1 免疫佐剂研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.1 免疫佐剂的作用机理 | 第13页 |
| 1.1.2 铝盐佐剂 | 第13页 |
| 1.1.3 油乳佐剂 | 第13-14页 |
| 1.1.4 弗氏佐剂 | 第14页 |
| 1.1.5 脂质体免疫佐剂 | 第14页 |
| 1.1.6 天然来源免疫佐剂 | 第14-15页 |
| 1.1.7 免疫刺激复合物 | 第15页 |
| 1.1.8 细胞因子免疫佐剂 | 第15页 |
| 1.2 CpG ODN的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 CpG ODN的发现 | 第16页 |
| 1.2.2 CpG ODN的免疫刺激作用 | 第16-17页 |
| 1.2.3 人工合成CpG ODN | 第17页 |
| 1.2.4 CpG ODN的免疫刺激作用 | 第17页 |
| 1.2.5 CpG ODN的应用 | 第17-19页 |
| 1.3 细粒棘球蚴病的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3.1 细粒棘球蚴病病原学 | 第19页 |
| 1.3.2 细粒棘球蚴病防治 | 第19页 |
| 1.3.3 细粒棘球蚴病Eg95疫苗的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 两种形式CpG佐剂对RAW264.7 的免疫刺激活性研究 | 第22-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株 | 第22页 |
| 2.1.3 试剂与耗材 | 第22页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第22-23页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 RAW264.7 细胞的培养 | 第23-24页 |
| 2.2.2 pUC18-CpG重组工程菌活化与扩大培养 | 第24页 |
| 2.2.3 Qiagen无内毒素大提质粒试剂盒提取pUC18-CpG质粒 | 第24页 |
| 2.2.4 pUC18-CpG定量 | 第24页 |
| 2.2.5 引物设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.2.6 pUC18-CpG、CpG ODN刺激RAW264.7 细胞 | 第25页 |
| 2.2.7 细胞RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.8 细胞RNA反转录 | 第26页 |
| 2.2.9 实时荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.2.10 细胞因子mRNA相对表达量的计算 | 第27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.3.1 pUC18-CpG电泳定量 | 第27-28页 |
| 2.3.2 细胞因子的熔解曲线 | 第28-29页 |
| 2.3.3 RAW264.7 细胞经两种形式CpG佐剂刺激后细胞因子mRNA的相对表达量 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 细粒棘球蚴Eg95重组蛋白表达、纯化及鉴定 | 第31-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 菌株 | 第31页 |
| 3.1.2 试剂与耗材 | 第31页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第31-32页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-35页 |
| 3.2.1 菌液活化 | 第32页 |
| 3.2.2 重组蛋白的诱导表达 | 第32页 |
| 3.2.3 重组蛋白的可溶性分析 | 第32-33页 |
| 3.2.4 重组蛋白的纯化与脱盐 | 第33页 |
| 3.2.5 目的蛋白内毒素去除 | 第33页 |
| 3.2.6 SDS-PAGE电泳鉴定 | 第33页 |
| 3.2.7 重组蛋白的Western blotting鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2.8 目的蛋白定量 | 第34-35页 |
| 3.3 结果及分析 | 第35-40页 |
| 3.3.1 重组蛋白的可溶性分析 | 第35-36页 |
| 3.3.2 重组蛋白的亲和层析纯化与脱盐 | 第36-38页 |
| 3.3.3 重组蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第38页 |
| 3.3.4 重组蛋白的Western blotting鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.5 重组蛋白的定量 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 两种形式CpG佐剂对细粒棘球蚴Eg95抗原的免疫增强作用研究 | 第41-49页 |
| 4.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 菌株 | 第41页 |
| 4.1.2 试剂与耗材 | 第41-42页 |
| 4.1.3 实验动物 | 第42页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第42页 |
| 4.1.5 主要仪器设备 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 4.2.1 两种形式CpG佐剂疫苗的制备 | 第42页 |
| 4.2.2 动物免疫与分组 | 第42-43页 |
| 4.2.3 小鼠采血及血清抗体水平检测 | 第43页 |
| 4.2.4 小鼠淋巴细胞体外刺激 | 第43-44页 |
| 4.2.5 引物设计与合成 | 第44页 |
| 4.2.6 细胞RNA提取与反转录 | 第44页 |
| 4.2.7 实时荧光定量PCR | 第44页 |
| 4.2.8 细胞因子mRNA相对表达量的计算 | 第44-45页 |
| 4.3 结论与分析 | 第45-47页 |
| 4.3.1 小鼠血清IgG抗体的ELISA鉴定 | 第45-46页 |
| 4.3.2 小鼠脾细胞经Eg95刺激后细胞因子mRNA的相对表达量 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58页 |
