| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-24页 |
| 1.1 秀丽隐杆线虫D型运动神经元介绍 | 第10-15页 |
| 1.1.1 秀丽隐杆线虫(C. elegans)的简介 | 第10页 |
| 1.1.2 秀丽隐杆线虫的生殖和生长发育周期 | 第10页 |
| 1.1.3 秀丽隐杆线虫D型运动神经元 | 第10-11页 |
| 1.1.4 影响GABA功能的重要基因 | 第11-12页 |
| 1.1.5 D型运动神经元的反转 | 第12-15页 |
| 1.2 CRISPR/cas9的发现及其应用 | 第15-18页 |
| 1.2.1 CRISPR/cas9的发现 | 第15-17页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas9的作用机制 | 第17页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9的应用 | 第17-18页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9在秀丽隐杆线虫中的应用 | 第18页 |
| 1.3 RNA干扰 | 第18-20页 |
| 1.3.1 RNA干扰 | 第18-19页 |
| 1.3.2 RNA干扰的分子机制 | 第19-20页 |
| 1.4 长非编码RNA简介 | 第20-24页 |
| 1.4.1 长非编码RNA的发现 | 第20-21页 |
| 1.4.2 长非编码RNA的作用方式与功能 | 第21-22页 |
| 1.4.3 基因间的长非编码(lincRNAs) | 第22页 |
| 1.4.4 长非编码RNA与疾病 | 第22-24页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第24-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 线虫品系和试剂 | 第24页 |
| 2.1.2 实验耗材和仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.3 实验试剂及配制 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-44页 |
| 2.2.1 线虫培养基的制备 | 第26页 |
| 2.2.2 LB培养基的制备 | 第26页 |
| 2.2.3 饲料准备 | 第26-27页 |
| 2.2.4 线虫接种 | 第27页 |
| 2.2.5 线虫的同步化处理 | 第27页 |
| 2.2.6 质粒构建 | 第27-31页 |
| 2.2.7 single worm PCR | 第31-32页 |
| 2.2.8 显微注射 | 第32-33页 |
| 2.2.9 激光共聚焦显微镜的使用 | 第33-34页 |
| 2.2.10 线虫总RNA的抽提 | 第34页 |
| 2.2.11 DNase消化 | 第34-35页 |
| 2.2.12 反转录 | 第35页 |
| 2.2.13 qPCR | 第35-36页 |
| 2.2.14 3'RACE (Rapid Amplification of cDNA 3'Ends) | 第36-38页 |
| 2.2.15 Feeding RNAi | 第38页 |
| 2.2.16 免疫共沉淀(Co-Immunopreciptation,co-IP) | 第38-39页 |
| 2.2.17 染色质免疫沉淀(Chromosome Immunoprecipitation,ChIP) | 第39-40页 |
| 2.2.18 Western blot | 第40-44页 |
| 第三章 实验结果 | 第44-62页 |
| 第一部分 | 第44-52页 |
| 3.1 构建原位表达标签蛋白质粒 | 第45页 |
| 3.2 获得原位表达标签蛋白(GFP)的稳定品系 | 第45-47页 |
| 3.3 验证标签蛋白(GFP)的原位表达 | 第47-48页 |
| 3.4 染色体免疫共沉淀 | 第48-52页 |
| 3.4.1 实验所需线虫生长时期的确定 | 第48-49页 |
| 3.4.2 超声条件的确定和实验线虫数目的确定 | 第49-50页 |
| 3.4.3 染色体免疫共沉淀的初步结果 | 第50-52页 |
| 第二部分 | 第52-62页 |
| 3.5 线虫D型运动神经元中有特异表达的长非编码RNA | 第52-53页 |
| 3.6 inc448的发现 | 第53页 |
| 3.7 inc448的功能的初步探究结果 | 第53-62页 |
| 3.7.1 inc448为pol Ⅱ独立转录的产物 | 第54-55页 |
| 3.7.2 inc448全长的确定 | 第55-56页 |
| 3.7.3 inc448受unc-30的调控 | 第56页 |
| 3.7.4 rgs-2在线虫中的表达图谱 | 第56-57页 |
| 3.7.5 inc448 feeding RNAi | 第57-62页 |
| 第四章 小结与讨论 | 第62-66页 |
| 4.1 小结与讨论 | 第62-64页 |
| 4.2 展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录1 论文中专业名次的中英文缩写 | 第72-73页 |
| 附录2 实验用溶液的配方 | 第73-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
