| 致谢 | 第6-10页 |
| 缩略词 | 第10-13页 |
| 摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-16页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 1 文献综述 | 第19-29页 |
| 1.1 植物miRNA的研究 | 第19-24页 |
| 1.1.1 植物miRNA的起源、合成和作用机制 | 第19-21页 |
| 1.1.1.1 植物miRNA的起源 | 第19-20页 |
| 1.1.1.2 植物miRNA的合成 | 第20页 |
| 1.1.1.3 植物miRNA的作用方式 | 第20-21页 |
| 1.1.2 植物miRNA的功能 | 第21-22页 |
| 1.1.3 植物miRNA与花粉发育 | 第22-23页 |
| 1.1.3.1 花粉粒形成过程 | 第22-23页 |
| 1.1.3.2 花粉发育相关miRNA | 第23页 |
| 1.1.4 植物低保守性miRNA的研究 | 第23-24页 |
| 1.2 PPR蛋白研究进展 | 第24-29页 |
| 1.2.1 PPR蛋白的结构及与RNA的识别 | 第25-26页 |
| 1.2.1.1 PPR蛋白的结构及分类 | 第25-26页 |
| 1.2.1.2 PPR蛋白与RNA的识别和结合机制 | 第26页 |
| 1.2.2 PPR蛋白的功能 | 第26-27页 |
| 1.2.3 PPR蛋白与花粉发育 | 第27-29页 |
| 2 白菜miR158及其靶基因Bra027656的克隆和表达分析 | 第29-45页 |
| 2.1 材料与方法 | 第29-37页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第29页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.3 基因组DNA的提取 | 第30页 |
| 2.1.4 总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.1.5 白菜miR158前体基因序列的扩增 | 第31-32页 |
| 2.1.6 Bra027656 DNA序列的扩增 | 第32-33页 |
| 2.1.7 Bra027656全长ORF扩增 | 第33页 |
| 2.1.8 相关核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第33页 |
| 2.1.9 qRT-PCR分析白菜miR158的表达 | 第33-34页 |
| 2.1.9.1 microRNA的反转录 | 第33页 |
| 2.1.9.2 miR158的qRT-PCR分析 | 第33-34页 |
| 2.1.9.3 pre-miR158的qRT-PCR分析 | 第34页 |
| 2.1.10 启动子-GUS报告系统分析白菜miR158的表达 | 第34-37页 |
| 2.1.10.1 启动子片段的克隆 | 第34页 |
| 2.1.10.2 启动子顺式调控元件分析 | 第34页 |
| 2.1.10.3 启动子-GUS融合表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.1.10.4 启动子-GUS融合表达载体的瞬时表达 | 第35页 |
| 2.1.10.5 启动子-GUS融合表达载体转化农杆菌 | 第35-36页 |
| 2.1.10.6 利用农杆菌介导启动子-GUS融合表达载体转化拟南芥 | 第36页 |
| 2.1.10.7 转基因拟南芥的筛选 | 第36页 |
| 2.1.10.8 GUS组织化学染色分析 | 第36-37页 |
| 2.2 结果 | 第37-42页 |
| 2.2.1 白菜miR158前体基因的克隆和序列分析 | 第37-38页 |
| 2.2.2 Bra027656编码一个PPR蛋白 | 第38-39页 |
| 2.2.3 白菜miR158不同前体转录本存在时空表达差异 | 第39-42页 |
| 2.3 讨论 | 第42-45页 |
| 3 白菜miR158在花粉发育中的生物学功能鉴定 | 第45-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第45-51页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第45页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第45页 |
| 3.1.3 抑制表达miR158载体的构建 | 第45-47页 |
| 3.1.3.1 STTM158序列的设计 | 第46页 |
| 3.1.3.2 2×35S-PBI121载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.1.3.3 miR158抑制表达载体的构建 | 第47页 |
| 3.1.4 菜心的遗传转化 | 第47-49页 |
| 3.1.4.1 培养基的配置 | 第48页 |
| 3.1.4.2 播种培养 | 第48页 |
| 3.1.4.3 预培养 | 第48页 |
| 3.1.4.4 共培养 | 第48-49页 |
| 3.1.4.5 分化培养 | 第49页 |
| 3.1.4.6 继代培养 | 第49页 |
| 3.1.4.7 生根培养 | 第49页 |
| 3.1.4.8 炼苗和移栽 | 第49页 |
| 3.1.5 转基因植株的分子生物学检测 | 第49-50页 |
| 3.1.5.1 DNA提取、总RNA的提取和cDNA的合成 | 第49页 |
| 3.1.5.2 转基因植株PCR检测 | 第49-50页 |
| 3.1.5.3 转基因菜心中miR158及其靶基因Bra027656的表达量检测 | 第50页 |
| 3.1.6 转基因植株的形态学和细胞学观察 | 第50-51页 |
| 3.1.6.1 植株形态学观察 | 第50页 |
| 3.1.6.2 转基因菜心花粉活力检测 | 第50页 |
| 3.1.6.3 花粉扫描电镜观察 | 第50页 |
| 3.1.6.4 花蕾半薄切片和透射电镜观察 | 第50-51页 |
| 3.2 结果 | 第51-58页 |
| 3.2.1 成功构建白菜miR158抑制表达载体 | 第51-52页 |
| 3.2.2 成功获得抑制表达和过表达白菜miR158转基因菜心 | 第52-54页 |
| 3.2.2.1 获得转基因菜心 | 第52-53页 |
| 3.2.2.2 转基因菜心miR158表达量升高或降低 | 第53-54页 |
| 3.2.3 Bra-miR158表达受抑制后不影响植株生长发育 | 第54-55页 |
| 3.2.4 Bra-miR158的过量表达导致花粉发育异常 | 第55-58页 |
| 3.2.4.1 花粉发育的异常始于单核小孢子时期 | 第55-56页 |
| 3.2.4.2 发育异常的花粉粒内含物降解 | 第56-58页 |
| 3.3 讨论 | 第58-61页 |
| 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
