| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 缩略词 | 第6-11页 |
| 1 引言 | 第11-24页 |
| 1.1 柳枝稷的形态特征及应用 | 第11-12页 |
| 1.2 MicroRNA研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 MicroRNAs的发现 | 第12-13页 |
| 1.2.2 MiRNAs在植物中的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 MiRNAs生物合成及作用机制 | 第14-16页 |
| 1.3.1 MiRNA基因的转录和加工 | 第14页 |
| 1.3.2 MiRNA进入到RNA诱导沉默复合体 | 第14页 |
| 1.3.3 MiRNAs调控基因表达的方式 | 第14-15页 |
| 1.3.4 MiRNAs靶基因及预测 | 第15-16页 |
| 1.4 植物miRNAs的功能 | 第16-18页 |
| 1.4.1 miRNAs参与调控植物的生长发育 | 第16-17页 |
| 1.4.2 miRNAs参与调控植物胁迫应答机制 | 第17-18页 |
| 1.5 MiRNA319研究进展 | 第18-21页 |
| 1.5.1 MiR319靶基因的鉴定 | 第18-19页 |
| 1.5.2 MiRNA319及靶基因的生物学功能 | 第19-21页 |
| 1.6 研究内容及技术路线 | 第21-24页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第21-23页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第23-24页 |
| 2 柳枝稷miRNA319基因的克隆与表达 | 第24-31页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第24页 |
| 2.1.2 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.3 生物试剂 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 柳枝稷的培养方法 | 第24页 |
| 2.2.2 总RNA提取及cDNA合成 | 第24-26页 |
| 2.2.3 柳枝稷基因组DNA提取 | 第26页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.5 目的片段的测序 | 第27-28页 |
| 2.2.6 Pvi-mi319基因的时空表达分析 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-30页 |
| 2.3.1 Pvi-miR319a基因的同源克隆 | 第28-30页 |
| 2.3.2 Pvi-miR319a的空间表达分析 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 3 柳枝稷Pvi-miR319a基因在水稻中的异位表达及表型分析 | 第31-41页 |
| 3.1 植物材料 | 第31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.2.1 过表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 3.2.2 转基因实验 | 第33-34页 |
| 3.2.3 转基因水稻的鉴定 | 第34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-40页 |
| 3.3.1 Pvi-miR319a过量表达转基因植株的鉴定 | 第34-38页 |
| 3.3.2 过量表达Pvi-miR319a基因导致转基因水稻多种表型变化 | 第38-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 4 Pvi-miR319a基因的靶基因预测及功能鉴定 | 第41-55页 |
| 4.1 实验材料 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-45页 |
| 4.2.1 qRT-PCR分析预测靶基因的表达情况 | 第41-42页 |
| 4.2.2 PvPCF5的时空表达分析 | 第42页 |
| 4.2.3 烟草的瞬时表达实验 | 第42页 |
| 4.2.4 PvPCF5的生物信息学分析 | 第42-43页 |
| 4.2.5 质粒大提(选用Qiagen公司质粒大提试剂盒) | 第43页 |
| 4.2.6 亚细胞定位实验 | 第43-44页 |
| 4.2.7 转录激活实验 | 第44-45页 |
| 4.3 结果与分析 | 第45-54页 |
| 4.3.1 转基因植株中Pvi-miR319a预测靶基因的表达分析 | 第45-46页 |
| 4.3.2 PvPCF5基因的鉴定及表达模式分析 | 第46-48页 |
| 4.3.3 烟草瞬时表达证明PvPCF5是Pvi-miR319a的靶基因 | 第48-49页 |
| 4.3.4 柳枝稷PvPCF5基因编码了一个TCP转录因子蛋白 | 第49-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-55页 |
| 5 结论与展望 | 第55-57页 |
| 5.1 结论 | 第55页 |
| 5.2 展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 个人简介 | 第63-64页 |
| 导师简介 | 第64-65页 |
| 获得成果目录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
