| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 主要符号表 | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-19页 |
| 2 基于铁蛋白的体外可控自组装与功能化 | 第19-53页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第19-22页 |
| 2.1.1 菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 溶液配方 | 第22-24页 |
| 2.2.1 培养基及抗生素 | 第22页 |
| 2.2.2 SDS-PAGE电泳缓冲液 | 第22-23页 |
| 2.2.3 蛋白质非变性琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第23页 |
| 2.2.4 蛋白质储存缓冲液 | 第23页 |
| 2.2.5 蔗糖密度梯度离心缓冲液 | 第23-24页 |
| 2.2.6 蛋白质诱导表达缓冲液 | 第24页 |
| 2.2.7 透射电子显微镜负染液 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-34页 |
| 2.3.1 菌种的活化 | 第24-25页 |
| 2.3.2 BAP-rHF的诱导表达 | 第25页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE检测分析BAP-rHF的表达 | 第25页 |
| 2.3.4 BAP-rHF的纯化 | 第25-29页 |
| 2.3.5 BCA法蛋白浓度测定 | 第29页 |
| 2.3.6 蛋白的保存 | 第29页 |
| 2.3.7 酶纳米复合物的组装 | 第29-33页 |
| 2.3.8 酶纳米复合物结构的表征 | 第33-34页 |
| 2.4 实验结果 | 第34-50页 |
| 2.4.1 BAP-rHF的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.4.2 BAP-rHF的可溶性 | 第35页 |
| 2.4.3 BAP-rHF的热稳定性 | 第35-36页 |
| 2.4.4 BAP-rHF的蔗糖密度梯度离心 | 第36-37页 |
| 2.4.5 BAP-rHF的凝胶排阻层析 | 第37-38页 |
| 2.4.6 BAP-rHF的纯度分析及生物素化验证 | 第38-40页 |
| 2.4.7 蛋白浓度的测定 | 第40页 |
| 2.4.8 酶纳米复合物的制备 | 第40-41页 |
| 2.4.9 酶纳米复合物的结构分析 | 第41-46页 |
| 2.4.10 ENC的纯化 | 第46-49页 |
| 2.4.11 ENC的功能验证 | 第49-50页 |
| 2.4.12 ENC的高灵敏免疫分析 | 第50页 |
| 2.5 讨论 | 第50-52页 |
| 2.6 结论 | 第52-53页 |
| 3 基于铁蛋白的胞内可控自组装与功能化 | 第53-83页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第53-56页 |
| 3.1.1 菌株 | 第53页 |
| 3.1.2 PCR扩增引物 | 第53-54页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第54-56页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第56页 |
| 3.2 溶液配方 | 第56-58页 |
| 3.2.1 培养基及抗生素 | 第56页 |
| 3.2.2 SDS-PAGE电泳缓冲液 | 第56页 |
| 3.2.3 蛋白质储存缓冲液 | 第56页 |
| 3.2.4 蛋白质诱导表达缓冲液 | 第56页 |
| 3.2.5 透射电镜负染液 | 第56-57页 |
| 3.2.6 镍亲和层析溶液 | 第57页 |
| 3.2.7 Strep-tag~?蛋白亲和纯化溶液 | 第57页 |
| 3.2.8 蛋白质免疫印迹分析缓冲液 | 第57-58页 |
| 3.3 实验方法 | 第58-71页 |
| 3.3.1 菌种的活化 | 第58页 |
| 3.3.2 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第58-59页 |
| 3.3.3 目的基因SPG-rHF和rHF的扩增 | 第59-61页 |
| 3.3.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第61页 |
| 3.3.5 核酸凝胶电泳胶回收 | 第61-62页 |
| 3.3.6 核酸浓度的测定 | 第62页 |
| 3.3.7 基因片段及载体的酶切反应 | 第62-63页 |
| 3.3.8 基因片段及载体的连接反应 | 第63-65页 |
| 3.3.9 感受态细胞的制备 | 第65-67页 |
| 3.3.10 大肠杆菌的转化 | 第67页 |
| 3.3.11 重组质粒的验证 | 第67-68页 |
| 3.3.12 基因测序 | 第68页 |
| 3.3.13 菌种的保存 | 第68-69页 |
| 3.3.14 SPG-rHF/rHF的表达 | 第69页 |
| 3.3.15 SPG-rHF/rHF的纯化 | 第69-70页 |
| 3.3.16 SDS-PAGE分析 | 第70页 |
| 3.3.17 铁蛋白的透射电子显微镜表征 | 第70页 |
| 3.3.18 Western Blot验证SPG-rHF/rHF的混合自组装 | 第70-71页 |
| 3.4 实验结果 | 第71-80页 |
| 3.4.1 共表达载体的构建 | 第71-75页 |
| 3.4.2 诱导 | 第75-76页 |
| 3.4.3 热变性 | 第76-77页 |
| 3.4.4 蛋白的两步亲和纯化 | 第77-78页 |
| 3.4.5 铁蛋白纳米颗粒的电镜表征 | 第78-79页 |
| 3.4.6 不同蛋白亚基混合自组装的验证 | 第79-80页 |
| 3.5 讨论 | 第80-81页 |
| 3.6 结论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 文献综述 基于铁蛋白的可控和非对称自组装 | 第87-127页 |
| 1 自组装 | 第89-91页 |
| 1.1 组装元件广泛 | 第89页 |
| 1.2 组装环境多样 | 第89页 |
| 1.3 组装条件温和 | 第89-90页 |
| 1.4 自组装的自发性 | 第90页 |
| 1.5 自组装的有序性 | 第90页 |
| 1.6 自组装的顺序性 | 第90页 |
| 1.7 自组装的可逆性 | 第90-91页 |
| 2 可控自组装 | 第91-98页 |
| 2.1 介质介导的可控自组装 | 第91-94页 |
| 2.1.1 DNA介导的可控自组装 | 第91-92页 |
| 2.1.2 肽介导的可控自组装 | 第92-93页 |
| 2.1.3 Ni-NTA相互作用介导的可控组装 | 第93-94页 |
| 2.2 实验条件改变介导的可控自组装 | 第94-95页 |
| 2.2.1 构建元件 | 第94页 |
| 2.2.2 离子强度 | 第94-95页 |
| 2.3 外力介导的可控自组装 | 第95-96页 |
| 2.4 催组剂介导的可控自组装 | 第96-98页 |
| 3 非对称自组装 | 第98-105页 |
| 3.1 非对称自组装的概念 | 第98-99页 |
| 3.2 非对称结构的应用 | 第99-100页 |
| 3.3 非对称自组装的方法 | 第100-105页 |
| 3.3.1 表面掩蔽法 | 第100-102页 |
| 3.3.2 选择性修饰 | 第102-103页 |
| 3.3.3 亚基解离-重组 | 第103-105页 |
| 3.3.4 选择性沉淀 | 第105页 |
| 4 铁蛋白 | 第105-116页 |
| 4.1 铁蛋白的结构 | 第105-110页 |
| 4.1.1 铁蛋白的亚基组成 | 第105-106页 |
| 4.1.2 铁蛋白的电荷分布 | 第106页 |
| 4.1.3 铁蛋白的水铁矿核心 | 第106-107页 |
| 4.1.4 铁蛋白的对称性 | 第107-108页 |
| 4.1.5 铁蛋白的修饰 | 第108页 |
| 4.1.6 铁蛋白的多功能化 | 第108-109页 |
| 4.1.7 铁蛋白的解离和不完全重组 | 第109-110页 |
| 4.2 铁蛋白的应用 | 第110-111页 |
| 4.3 基于铁蛋白的自组装 | 第111-112页 |
| 4.4 基于铁蛋白的可控自组装 | 第112-113页 |
| 4.5 铁蛋白的非对称自组装 | 第113-116页 |
| 4.5.1 解离-重组方法 | 第113-114页 |
| 4.5.2 铁蛋白的四重轴介导的非对称自组装 | 第114-116页 |
| 5 讨论及展望 | 第116-119页 |
| 参考文献 | 第119-127页 |
| 致谢 | 第127-129页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第129-130页 |
