| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第15-37页 |
| 1.1 多不饱和脂肪酸的研究概况 | 第15-19页 |
| 1.1.1 多不饱和脂肪酸的生物合成途径 | 第15-16页 |
| 1.1.2 PUFAs的生理功能 | 第16-17页 |
| 1.1.3 PUFAs的来源 | 第17-18页 |
| 1.1.4 目前PUFAs来源存在的问题及前景 | 第18-19页 |
| 1.2 脂肪酸脱氢酶的研究概况 | 第19-22页 |
| 1.2.1 概述 | 第19-20页 |
| 1.2.2 脂肪酸脱氢酶的特点 | 第20-21页 |
| 1.2.3 脂肪酸脱氢酶的功能研究 | 第21-22页 |
| 1.3 基因敲除系统概况 | 第22-33页 |
| 1.3.1 基因敲除的概念、原理及研究进展 | 第22-23页 |
| 1.3.2 微生物基因敲除系统 | 第23-29页 |
| 1.3.3 基因敲除方法及技术要点 | 第29-32页 |
| 1.3.4 基因敲除技术的应用 | 第32页 |
| 1.3.5 前景与展望 | 第32-33页 |
| 1.4 选题依据和技术路线 | 第33-37页 |
| 1.4.1 选题依据 | 第33-34页 |
| 1.4.2 工作背景 | 第34-36页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第36-37页 |
| 第二章 红冬孢酵母Δ~(12)-脂肪酸脱氢酶基因的克隆与表达 | 第37-51页 |
| 2.1 材料 | 第37-38页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第37页 |
| 2.1.2 主要试剂配方和培养基配方 | 第37-38页 |
| 2.1.3 引物合成和测序 | 第38页 |
| 2.2 方法 | 第38-44页 |
| 2.2.1 红冬孢酵母Δ~(12)-脂肪酸脱氢酶基因cDNA的克隆和序列分析 | 第38-43页 |
| 2.2.3 红冬孢酵母Δ12-脂肪酸脱氢酶基因的真核表达 | 第43页 |
| 2.2.4 脂肪酸气象色谱分析 | 第43-44页 |
| 2.3 结果与分析 | 第44-50页 |
| 2.3.1 总RNA的提取 | 第44页 |
| 2.3.2 红冬孢酵母Δ12-脂肪酸脱氢酶基因cDNA的克隆与序列分析 | 第44-48页 |
| 2.3.3 重组表达质粒pY3RKD12的构建 | 第48页 |
| 2.3.4 红冬孢酵母YM25235A~(12)-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中的诱导表达 | 第48-50页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第50-51页 |
| 第三章 红冬孢酵母Δ~(12)-脂肪酸脱氢酶基因的敲除及低温适应性研究 | 第51-77页 |
| 3.1 材料 | 第51-52页 |
| 3.1.1 试剂与仪器 | 第51页 |
| 3.1.2 培养基 | 第51页 |
| 3.1.3 菌株与质粒 | 第51页 |
| 3.1.4 引物合成和测序 | 第51-52页 |
| 3.2 方法 | 第52-60页 |
| 3.2.1 红冬孢酵母Δ~(12)-脂肪酸脱氢酶基因DNA的克隆和序列分析 | 第52-53页 |
| 3.2.2 基因敲除载体pRH-D12D的构建 | 第53-57页 |
| 3.2.3 YM25235潮霉素B抗性筛选实验 | 第57-58页 |
| 3.2.4 红冬孢酵母YM25235的转化 | 第58-59页 |
| 3.2.5 PCR法鉴定阳性转化子 | 第59页 |
| 3.2.6 红冬孢酵母Δ~(12)-脂肪酸脱氢酶基因缺失突变株的脂肪酸甲酯化方法 | 第59-60页 |
| 3.2.7 Δ~(12)-脂肪酸脱氢酶基因缺失突变株的生长实验测定 | 第60页 |
| 3.3 结果与分析 | 第60-73页 |
| 3.3.1 Δ~(12)-脂肪酸脱氢酶基因组序列的PCR扩增 | 第60-61页 |
| 3.3.2 序列分析 | 第61-63页 |
| 3.3.3 基因敲除载体的构建 | 第63-68页 |
| 3.3.4 YM25235对潮霉素B药物抗性筛选 | 第68页 |
| 3.3.5 红冬孢酵母的转化、筛选及鉴定 | 第68-70页 |
| 3.3.6 基因敲除菌株生长及总脂肪酸的气相色谱测定分析 | 第70-73页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第73-77页 |
| 第四章 总结与展望 | 第77-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 附录A 攻读硕士学位期间发表论文 | 第89-91页 |
| 附录B 试验常用试剂 | 第91-93页 |
| 附录C 主要仪器 | 第93页 |
