| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-54页 |
| 1.1 引言 | 第12-14页 |
| 1.2 有丝分裂期的重要激酶及其功能 | 第14-32页 |
| 1.2.1 CDK1激酶 | 第14-17页 |
| 1.2.2 Aurora A激酶 | 第17-19页 |
| 1.2.3 Aurora B激酶 | 第19-20页 |
| 1.2.4 PLK1激酶 | 第20-25页 |
| 1.2.5 Bub1激酶 | 第25页 |
| 1.2.6 Mps1激酶 | 第25-28页 |
| 1.2.7 Haspin激酶 | 第28页 |
| 1.2.8 NEK激酶 | 第28-30页 |
| 1.2.9 Greatwall激酶 | 第30-32页 |
| 1.3 参与有丝分裂调控的重要蛋白磷酸酶 | 第32-36页 |
| 1.3.1 双特异性的蛋白磷酸酶CDC25 | 第32-33页 |
| 1.3.2 蛋白磷酸酶PP1 | 第33-34页 |
| 1.3.3 蛋白磷酸酶PP2A | 第34-36页 |
| 1.4 蛋白质赖氨酸乙酰化修饰 | 第36-44页 |
| 1.4.1 组蛋白的乙酰化修饰 | 第36页 |
| 1.4.2 蛋白质乙酰转移酶 | 第36-39页 |
| 1.4.3 蛋白质乙酰转移酶与有丝分裂调控 | 第39页 |
| 1.4.4 蛋白质去乙酰酶及抑制剂 | 第39-42页 |
| 1.4.5 蛋白质去乙酰酶与有丝分裂调控 | 第42-44页 |
| 1.5 非天然氨基酸嵌入技术在乙酰化修饰研究中的应用 | 第44-54页 |
| 1.5.1 非天然氨基酸嵌入技术及研究进展 | 第44-46页 |
| 1.5.2 通过基因操作提高非天然氨基酸的嵌入效率 | 第46-48页 |
| 1.5.3 四联体密码子技术的发展 | 第48-50页 |
| 1.5.4 模式生物中非天然氨基酸的引入 | 第50页 |
| 1.5.5 乙酰化赖氨酸嵌入技术在乙酰化修饰研究中的应用 | 第50-54页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第54-74页 |
| 2.1 实验材料 | 第54-57页 |
| 2.1.1 载体 | 第54页 |
| 2.1.2 质粒 | 第54-55页 |
| 2.1.3 细胞系 | 第55页 |
| 2.1.4 菌株 | 第55页 |
| 2.1.5 抗体 | 第55-56页 |
| 2.1.6 试剂 | 第56-57页 |
| 2.2 实验方法 | 第57-74页 |
| 2.2.1 氯化铷法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第57-58页 |
| 2.2.2 常规分子克隆 | 第58-61页 |
| 2.2.3 定点突变质粒 | 第61-63页 |
| 2.2.4 纯化用于细胞转染的质粒 | 第63页 |
| 2.2.5 利用磷酸钙法转染质粒到真核细胞中 | 第63-64页 |
| 2.2.6 利用脂质体转染质粒和siRNA到真核细胞中 | 第64页 |
| 2.2.7 shRNA质粒的构建及慢病毒的包装 | 第64-66页 |
| 2.2.8 流式细胞术 | 第66页 |
| 2.2.9 细胞免疫荧光染色 | 第66-67页 |
| 2.2.10 活细胞观察 | 第67页 |
| 2.2.11 免疫印迹实验 | 第67-68页 |
| 2.2.12 GST融合蛋白的表达与纯化 | 第68-69页 |
| 2.2.13 His融合蛋白的表达与纯化 | 第69页 |
| 2.2.14 MBP融合蛋白的表达与纯化 | 第69-70页 |
| 2.2.15 利用大肠杆菌表达208位赖氨酸乙酰化修饰的PLK1蛋白 | 第70页 |
| 2.2.16 体外磷酸化反应 | 第70-71页 |
| 2.2.17 体外去磷酸化Aurora B反应 | 第71页 |
| 2.2.18 体外乙酰化反应 | 第71-72页 |
| 2.2.19 酶动力学检测实验 | 第72页 |
| 2.2.20 分子筛实验 | 第72-73页 |
| 2.2.21 免疫共沉淀 | 第73-74页 |
| 第三章 TIP60介导的Aurora B激酶的乙酰化修饰研究 | 第74-97页 |
| 3.1 TIP60抑制导致细胞有丝分裂异常 | 第74页 |
| 3.2 TIP60活性缺失造成Aurora B激酶活性降低 | 第74-77页 |
| 3.3 TIP60富集于未正确连接微管的动点上 | 第77页 |
| 3.4 TIP60对于动点-微管连接的纠错是必须的 | 第77页 |
| 3.5 TIP60与Aurora B的纠错功能存在关联 | 第77-80页 |
| 3.6 TIP60可以在细胞内与Aurora B相互作用 | 第80页 |
| 3.7 TIP60可以在体外直接乙酰化Aurora B | 第80页 |
| 3.8 TIP60负责了细胞内Aurora B的乙酰化 | 第80页 |
| 3.9 TIP60介导的Aurora B乙酰化修饰主要发生在第215位赖氨酸 | 第80-86页 |
| 3.10 第215位赖氨酸乙酰化修饰促进了Aurora B的激酶活性 | 第86-89页 |
| 3.11 第215位赖氨酸乙酰化抑制了PP2A介导的Aurora B的去磷酸化 | 第89-92页 |
| 3.12 CDK1介导的TIP60磷酸化促进了Aurora B激酶的活性 | 第92页 |
| 3.13 小结与讨论 | 第92-97页 |
| 第四章 PCAF介导的PLK1激酶乙酰化修饰研究 | 第97-106页 |
| 4.1 PLK1在G2期发生208位赖氨酸乙酰化修饰 | 第97-99页 |
| 4.2 体外重组表达第208位赖氨酸乙酰化修饰的PLK1 | 第99页 |
| 4.3 第208位赖氨酸乙酰化修饰抑制了Aurora A对PLK1的活化 | 第99-101页 |
| 4.4 PCAF通过乙酰化PLK1第208位赖氨酸调控了细胞周期进程 | 第101-104页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 在读期间取得的研究成果 | 第130页 |
