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银杏LEAFY同源基因的分离克隆及其相关基础研究

中文摘要第9-12页
缩略语第12-14页
第一章 植物开花的调控机制研究进展第14-35页
    1 开花调控途径第14-22页
        1.1 春化促进途径第15-18页
        1.2 自动促进途径第18页
        1.3 光周期促进途径第18-21页
        1.4 GA促进途径第21页
        1.5 开花抑制途径第21-22页
    2 多条开花调控途径之间的联系第22-25页
        2.1 多条开花调控途径对花分生组织特征基因LEAFY的转录调控第23-24页
        2.2 集中在花时基因FT和SOC1的调控上第24-25页
    3 分生组织特征基因第25-29页
        3.1 花分生组织特征基因第26-27页
        3.2 花序分生组织特征基因第27-28页
        3.3 LFY、AP1/CAL、TFL之间的相互作用决定着分生组织的发育方向第28-29页
    4 高等植物花分生组织特征基因LFY/FLO的研究进展第29-35页
        4.1 LFY基因是花分生组织特征基因第29-30页
        4.2 LFY表达量与拟南芥的成花启动第30-31页
        4.3 LFY的其它功能第31页
        4.4 LFY基因表达的调控第31-32页
        4.5 LFY同源基因的研究第32-35页
第二章 银杏组织培养及遗传转化研究现状第35-38页
    1 银杏组织培养第35-37页
        1.1 胚胎的离体培养第35页
        1.2 器官、组织培养第35-37页
            1.2.1 子叶第35页
            1.2.2 未成熟胚胚乳第35-36页
            1.2.3 孢子培养第36页
            1.2.4 叶子、叶柄、茎段第36页
            1.2.5 原生质体培养第36页
            1.2.6 胚状体的诱导第36-37页
    2 银杏的转基因研究第37-38页
第三章 立论依据和研究内容第38-40页
第四章 木本果树基因组DNA提取方法改良第40-44页
    1 材料与方法第40-42页
        1.1 材料与方法第40-41页
        1.2 改进的CTAB法第41-42页
        1.3 紫外分光光度计分析第42页
    2 结果与分析第42-44页
第五章 银杏雄株GinLFY全长基因的分离与克隆第44-54页
    1 材料与方法第45-49页
        1.1 材料第45页
            1.1.1 植物材料第45页
            1.1.2 菌株和质粒第45页
            1.1.3 化学试剂第45页
            1.1.4 寡核苷酸引物第45页
        1.2 方法第45-49页
            1.2.1 基因组DNA的提取第45页
            1.2.2 PCR扩增方法第45-46页
                1.2.2.1 引物设计第45-46页
                1.2.2.2 PCR反应体系第46页
            1.2.3 DNA片段的克隆第46-49页
                1.2.3.1 PCR产物的回收纯化第46-47页
                1.2.3.2 回收产物的连接第47页
                1.2.3.3 感受态细胞制备方法(CaCL_2法)第47页
                1.2.3.4 连接产物转化大肠杆菌第47-48页
                1.2.3.5 重组克隆的筛选与鉴定第48页
                1.2.3.6 碱裂解法小批量抽提质粒第48页
                1.2.3.7 重组质粒的酶切第48-49页
        1.3 DNA序列测定第49页
    2 结果与分析第49-54页
        2.1 PCR产物的获得和克隆第49-51页
        2.2 基因序列与同源性分析第51-54页
第六章 银杏雄株GinNdly全长基因的分离和克隆第54-60页
    1 材料与方法第54-55页
        1.1 材料第54页
            1.1.1 植物材料、菌株、质粒第54页
            1.1.2 寡核苷酸引物第54页
        1.2 方法第54-55页
            1.2.1 基因组DNA与质粒DNA的提取第54页
            1.2.2 PCR扩增方法第54-55页
            1.2.3 DNA片段重组入质粒载体第55页
    2 结果与讨论第55-60页
        2.1 PCR产物的获得和克隆第55页
        2.2 基因序列测定与结构分析第55-58页
        2.3 讨论第58-60页
第七章 银杏的组织培养第60-73页
    1 材料与方法第60-61页
        1.1 材料第60页
            1.1.1 植物材料第60页
            1.1.2 药品第60页
        1.2 方法第60-61页
    2 结果与讨论第61-69页
        2.1 愈伤组织的诱导第61-67页
            2.1.1 不同的生长素对银杏胚切段愈伤组织诱导的影响第61-63页
            2.1.2 NAA与BA,KT和ZT培养银杏子叶的观察第63页
            2.1.3 各种基本培养基诱导愈伤组织效果的比较第63-64页
            2.1.4 银杏各种外植体愈伤组织的诱导第64-65页
            2.1.5 各种抗氧化剂防止银杏愈伤组织褐化的效果第65-66页
            2.1.6 不同培养基上银杏愈伤组织的继代效果第66-67页
            2.1.7 银杏未成熟胚胚乳的培养第67页
        2.2 成熟胚培养快速获得银杏幼苗第67-68页
        2.3 茎段腋芽的萌发第68-69页
    3 讨论第69-73页
第八章 GinNdly基因的植物表达载体的构建第73-83页
    1 材料与方法第73-77页
        1.1 菌株和质粒第73页
        1.2 酶及生化药剂第73页
        1.3 PCR引物第73页
        1.4 PCR反应第73-74页
        1.5 质粒构建第74-76页
            1.5.1 酶切产物回收方法第74页
            1.5.2 质粒pGdly中GinNdly基因插入方向的辨认第74页
            1.5.3 反向GinNdly基因片断的制备第74页
            1.5.4 正向GinNdly基因片断的制备第74页
            1.5.5 CaMV35S启动子制备第74页
            1.5.6 nos终止子DNA片段制备第74-75页
            1.5.7 元载体pBI121的制备第75页
            1.5.8 元载体pCAMBIA1301的制备第75页
            1.5.9 质粒构建第75-76页
        1.6 农杆菌的转化第76-77页
            1.6.1 采用三亲杂交法将双元载体导入农杆菌菌株第76页
            1.6.2 利用细胞感受态法直接将双元载体导入农杆菌第76-77页
        1.7 农杆菌及农杆菌中质粒鉴定第77页
            1.7.1 1.3-酮基乳糖反应第77页
            1.7.2 农杆菌中质粒的鉴定第77页
    2 结果与讨论第77-83页
第九章 银杏GinNdly基因转化矮牵牛第83-88页
    1 材料和方法第83-84页
        1.1 材料第83页
            1.1.1 植物材料第83页
            1.1.2 菌株和质粒第83页
            1.1.3 化学试剂第83页
            1.1.4 寡核苷酸引物第83页
        1.2 方法第83-84页
            1.2.1 矮牵牛的组织培养第83页
            1.2.2 矮牵牛无菌组织的获得第83页
            1.2.3 根癌农杆菌培养第83-84页
            1.2.4 外植体的感染第84页
            1.2.5 矮牵牛基因组DNA快速提取第84页
            1.2.6 转基因植株的鉴定第84页
    2 结果第84-86页
        2.1 培养基中不同激素配比对愈伤组织诱导及不定芽分化的影响第84-85页
        2.2 抗性芽的获得第85页
        2.3 农杆菌浓度对遗传转化的影响第85-86页
    3 讨论第86-88页
展望和后续研究第88-89页
参考文献第89-100页
英文摘要第100页
致谢第103-104页
附录第104页

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