| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-26页 |
| 1.1 异丁醇简介 | 第12-13页 |
| 1.1.1 异丁醇的结构与性质 | 第12页 |
| 1.1.2 异丁醇的用途 | 第12-13页 |
| 1.1.3 异丁醇的工业生产方法 | 第13页 |
| 1.2 微生物合成异丁醇的研究进展 | 第13-20页 |
| 1.2.1 合成生物学的定义 | 第13-14页 |
| 1.2.2 合成生物学的应用 | 第14页 |
| 1.2.3 合成异丁醇菌株 | 第14-16页 |
| 1.2.4 异丁醇生物合成途径 | 第16-17页 |
| 1.2.5 异丁醇生物合成相关酶及其调控机制 | 第17-19页 |
| 1.2.6 宿主菌应对异丁醇的压力响应及其调控机制 | 第19-20页 |
| 1.3 提高异丁醇生物合成的策略 | 第20-25页 |
| 1.3.1 阻断或弱化副产物的合成途径 | 第20-22页 |
| 1.3.2 强化异丁醇的合成途径 | 第22-23页 |
| 1.3.3 提高胞内还原力水平 | 第23-24页 |
| 1.3.4 其他策略 | 第24-25页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第2章 材料与方法 | 第26-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-33页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第26-28页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第28-31页 |
| 2.1.3 培养基、培养温度及抗生素使用浓度 | 第31页 |
| 2.1.4 工具酶及试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.5 抽提液和缓冲液 | 第32-33页 |
| 2.1.6 主要实验仪器 | 第33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-43页 |
| 2.2.1 分子实验方法 | 第33-37页 |
| 2.2.2 菌株对异丁醇的耐受性分析 | 第37页 |
| 2.2.3 重组载体的构建 | 第37-39页 |
| 2.2.4 重组质粒转化DH5α 大肠杆菌 | 第39页 |
| 2.2.5 重组质粒转化地衣芽胞杆菌 | 第39-40页 |
| 2.2.6 地衣芽胞杆菌的基因敲除 | 第40-41页 |
| 2.2.7 在地衣芽胞杆菌中筛选醇脱氢酶表达催化异丁醛转化成异丁醇 | 第41页 |
| 2.2.8 地衣芽胞杆菌异丁醇发酵培养 | 第41页 |
| 2.2.9 分析方法 | 第41-43页 |
| 第3章 结果与分析 | 第43-72页 |
| 3.1 异丁醇耐受性的分析 | 第43-46页 |
| 3.2 催化异丁醛转化成异丁醇的醇脱氢酶的筛选 | 第46-53页 |
| 3.2.1 醇脱氢酶表达载体的构建 | 第46-50页 |
| 3.2.2 醇脱氢酶在地衣芽胞杆菌中的表达 | 第50-53页 |
| 3.3 产异丁醇地衣芽胞杆菌工程菌的构建 | 第53-60页 |
| 3.3.1 醇脱氢酶整合型表达质粒的构建 | 第53-54页 |
| 3.3.2 地衣芽胞杆菌染色体上整合表达醇脱氢酶 | 第54-56页 |
| 3.3.3 酮酸脱羧酶表达质粒的构建 | 第56-57页 |
| 3.3.4 产异丁醇地衣芽胞杆菌工程菌的构建 | 第57-60页 |
| 3.4 基因bkdB缺失对地衣芽胞杆菌产异丁醇的影响 | 第60-64页 |
| 3.4.1 敲除质粒T2(2)-oriΔbkdB的构建 | 第60-62页 |
| 3.4.2 构建bkdB基因缺失菌株 | 第62-63页 |
| 3.4.3 bkdB缺失对DW2-02 工程菌异丁醇合成的影响 | 第63-64页 |
| 3.5 旁路途经基因缺失对异丁醇合成的影响 | 第64-72页 |
| 3.5.1 敲除质粒T2(2)-oriΔldh的构建 | 第64-65页 |
| 3.5.2 构建bkdB和ldh基因双缺失菌株 | 第65-67页 |
| 3.5.3 构建bkdB和leuA基因双缺失菌株 | 第67-68页 |
| 3.5.4 构建bkdB和alsD基因双缺失菌株 | 第68-69页 |
| 3.5.5 基因ldh、alsD和leuA的缺失对DW2-02ΔbkdB发酵产异丁醇的影响 | 第69-72页 |
| 第4章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 4.1 结论 | 第72页 |
| 4.2 展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及申请专利 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
