| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 生物法合成化学品的重要意义、研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.1 生物发酵法合成化学品的意义 | 第12页 |
| 1.1.2 生物发酵法合成化学品的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2 乙酸作为替代碳源合成化学品的意义及研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 乙酸作为替代碳源的意义和根据 | 第13-14页 |
| 1.2.2 乙酸为碳源微生物合成化学品研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3 甲羟戊酸的简介 | 第16-19页 |
| 1.3.1 甲羟戊酸的理化性质及应用 | 第16-17页 |
| 1.3.2 甲羟戊酸合成 | 第17-19页 |
| 1.4 琥珀酸简介 | 第19-21页 |
| 1.4.1 琥珀酸的理化性质 | 第19页 |
| 1.4.2 琥珀酸的用途 | 第19-20页 |
| 1.4.3 琥珀酸的制备 | 第20-21页 |
| 1.5 异戊二烯简介 | 第21-22页 |
| 1.5.1 异戊二烯的物理化学性质 | 第21页 |
| 1.5.2 异戊二烯的用途 | 第21-22页 |
| 1.5.3 异戊二烯的制备 | 第22页 |
| 1.6 代谢工程 | 第22-23页 |
| 1.7 DNTF废水 | 第23-24页 |
| 1.8 论文主要研究意义及研究内容 | 第24-25页 |
| 1.8.1 研究意义 | 第24页 |
| 1.8.2 主要研究内容 | 第24-25页 |
| 2 乙酸合成甲羟戊酸的条件优化及动力学特征 | 第25-46页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-27页 |
| 2.1.1 实验菌株与质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第27页 |
| 2.2 实验培养基 | 第27-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-31页 |
| 2.3.1 制备感受态细胞 | 第29-30页 |
| 2.3.2 质粒的提取 | 第30页 |
| 2.3.3 菌株转化 | 第30-31页 |
| 2.4 E.coli BL21(DE3)/ p YJM16/ pFHR-1 发酵产生甲羟戊酸 | 第31-33页 |
| 2.4.1 构建菌株 | 第31页 |
| 2.4.2 摇瓶发酵 | 第31页 |
| 2.4.3 产物检测 | 第31-33页 |
| 2.5 不同牛肉浸粉添加量条件下甲羟戊酸发酵 | 第33页 |
| 2.5.1 构建菌株 | 第33页 |
| 2.5.2 摇瓶发酵 | 第33页 |
| 2.5.3 发酵产物检测 | 第33页 |
| 2.6 不同的诱导温度下甲羟戊酸的发酵 | 第33-34页 |
| 2.6.1 构建菌株 | 第33页 |
| 2.6.2 摇瓶发酵 | 第33-34页 |
| 2.6.3 发酵产物检测 | 第34页 |
| 2.7 不同的发酵pH条件下甲羟戊酸的发酵 | 第34页 |
| 2.7.1 构建菌株 | 第34页 |
| 2.7.2 摇瓶发酵 | 第34页 |
| 2.7.3 发酵产物检测 | 第34页 |
| 2.8 乙酸为碳源合成甲羟戊酸发酵特性及动力学 | 第34-37页 |
| 2.8.1 制备感受态细胞 | 第34页 |
| 2.8.2 质粒的提取 | 第34页 |
| 2.8.3 菌株转化 | 第34-35页 |
| 2.8.4 种子培养 | 第35页 |
| 2.8.5 发酵罐发酵操作 | 第35-36页 |
| 2.8.6 产物检测 | 第36-37页 |
| 2.8.7 数据的采集和处理 | 第37页 |
| 2.9 结果与讨论 | 第37-44页 |
| 2.9.1 不同实验条件下细胞的生长 | 第37-38页 |
| 2.9.2 不同实验条件下甲羟戊酸产量及产率 | 第38-39页 |
| 2.9.3 细胞生长与甲羟戊酸合成关系 | 第39-40页 |
| 2.9.4 发酵过程中参数分析 | 第40-41页 |
| 2.9.5 甲羟戊酸发酵过程中的动力学模型分析 | 第41页 |
| 2.9.6 菌体生长动力学模型 | 第41-42页 |
| 2.9.7 甲羟戊酸合成动力学模型 | 第42-43页 |
| 2.9.8 基质消耗动力学模型 | 第43-44页 |
| 2.10 本章小结 | 第44-46页 |
| 3 乙酸联产甲羟戊酸及琥珀酸菌株筛选及高效菌株构建 | 第46-63页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第46-48页 |
| 3.1.1 实验菌株和质粒 | 第46-47页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第47页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第47-48页 |
| 3.2 实验培养基 | 第48-49页 |
| 3.3 乙酸产琥珀酸菌株筛选 | 第49-52页 |
| 3.3.1 前期准备 | 第49-50页 |
| 3.3.2 构建菌株 | 第50页 |
| 3.3.3 摇瓶发酵 | 第50页 |
| 3.3.4 不同发酵培养基的摇瓶发酵 | 第50-51页 |
| 3.3.5 产物检测 | 第51-52页 |
| 3.4 乙酸联产甲羟戊酸和琥珀酸 | 第52-54页 |
| 3.4.1 构建菌株 | 第52页 |
| 3.4.2 摇瓶发酵 | 第52-53页 |
| 3.4.3 产物检测 | 第53-54页 |
| 3.5 YJM16-pntAB的构建 | 第54-58页 |
| 3.5.1 pntAB基因的PCR扩增 | 第54-55页 |
| 3.5.2 pntAB扩增产物的纯化回收 | 第55页 |
| 3.5.3 pnt AB 扩增产物及载体 p YJM16 的酶切 | 第55页 |
| 3.5.4 酶切产物的纯化回收 | 第55-56页 |
| 3.5.5 酶切产物的连接 | 第56页 |
| 3.5.6 pntAB连接产物的转化 | 第56-57页 |
| 3.5.7 菌落PCR筛选 | 第57页 |
| 3.5.8 菌落PCR阳性克隆验证 | 第57-58页 |
| 3.6 结果分析 | 第58-62页 |
| 3.6.1 琥珀酸菌落筛选 | 第58-59页 |
| 3.6.2 YJM16-pntAB的构建 | 第59-61页 |
| 3.6.3 琥珀酸与甲羟戊酸的联产 | 第61-62页 |
| 3.7 本章小结 | 第62-63页 |
| 4 乙酸合成异戊二烯的菌株筛选及条件优化 | 第63-77页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第63-65页 |
| 4.1.1 实验菌株和质粒 | 第63-64页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第64页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第64-65页 |
| 4.2 实验培养基 | 第65-66页 |
| 4.3 乙酸合成异戊二烯菌株筛选 | 第66-71页 |
| 4.3.1 构建菌株 | 第66-68页 |
| 4.3.2 摇瓶发酵 | 第68页 |
| 4.3.3 产物检测 | 第68-71页 |
| 4.4 乙酸合成异戊二烯的条件优化 | 第71-73页 |
| 4.4.1 诱导温度的条件优化 | 第71页 |
| 4.4.2 发酵培养基的条件优化 | 第71-72页 |
| 4.4.3 发酵培养基pH的条件优化 | 第72-73页 |
| 4.5 结果分析 | 第73-76页 |
| 4.5.1 乙酸产异戊二烯及甲羟戊酸的菌株筛选 | 第73-74页 |
| 4.5.2 乙酸发酵产异戊二烯及甲羟戊酸的条件优化 | 第74-76页 |
| 4.6 本章小结 | 第76-77页 |
| 结论与展望 | 第77-80页 |
| 1 论文的主要结论 | 第77页 |
| 2 展望 | 第77-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第88-90页 |
