| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 犬细小病毒病原学 | 第12-13页 |
| 1.1.1 犬细小病毒形态及理化性质 | 第12页 |
| 1.1.2 CPV血凝特性 | 第12页 |
| 1.1.3 CPV的基因组结构及其复制 | 第12-13页 |
| 1.2 犬细小病毒的起源与进化 | 第13-14页 |
| 1.2.1 犬细小病毒的起源 | 第13页 |
| 1.2.2 犬细小病毒的进化 | 第13-14页 |
| 1.3 犬细小病毒流行病学 | 第14-15页 |
| 1.4 临床症状与致病机理 | 第15-16页 |
| 1.4.1 临床症状 | 第15页 |
| 1.4.2 致病机理 | 第15-16页 |
| 1.5 病理变化 | 第16页 |
| 1.5.1 心肌炎型 | 第16页 |
| 1.5.2 肠炎型 | 第16页 |
| 1.6 犬细小病毒病的诊断 | 第16-19页 |
| 1.6.1 病毒的分离培养 | 第16-17页 |
| 1.6.2 血凝及血凝抑制 | 第17页 |
| 1.6.3 电镜与免疫电镜观察 | 第17页 |
| 1.6.4 酶联免疫吸附试验 | 第17-18页 |
| 1.6.5 聚合酶链式反应 | 第18页 |
| 1.6.6 核苷酸测序法 | 第18-19页 |
| 1.6.7 免疫胶体金法 | 第19页 |
| 1.7 犬细小病毒的防治 | 第19-21页 |
| 1.7.1 犬细小病毒的预防 | 第19-20页 |
| 1.7.2 犬细小病毒病的治疗 | 第20-21页 |
| 1.8 研究背景与目的意义 | 第21-23页 |
| 第二章 贵阳地区犬细小病毒病的临床诊疗分析 | 第23-31页 |
| 2.1 材料 | 第23页 |
| 2.1.1 病例来源 | 第23页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第23页 |
| 2.1.3 治疗药物 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 临床初诊 | 第24页 |
| 2.2.2 临床确诊 | 第24页 |
| 2.2.3 治疗 | 第24-25页 |
| 2.3 结果 | 第25-30页 |
| 2.3.1 对症疗法治疗结果 | 第25-26页 |
| 2.3.2 支持疗法治疗结果 | 第26-27页 |
| 2.3.3 特异性疗法治疗结果 | 第27-28页 |
| 2.3.4 综合疗法治疗结果 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 贵阳地区犬细小病毒的分离鉴定及遗传进化分析 | 第31-52页 |
| 3.1 材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 病料 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂耗材与仪器 | 第31-32页 |
| 3.2 方法 | 第32-39页 |
| 3.2.1 样本的采集与处理 | 第32-33页 |
| 3.2.2 主要试剂的配制 | 第33-34页 |
| 3.2.3 病毒的分离 | 第34页 |
| 3.2.4 CPV DNA的提取 | 第34-35页 |
| 3.2.5 引物的设计 | 第35-36页 |
| 3.2.6 VP1、VP2基因的PCR扩增 | 第36页 |
| 3.2.7 PCR产物的回收 | 第36-37页 |
| 3.2.8 PCR产物的克隆 | 第37-38页 |
| 3.2.9 VP1、VP2基因的序列分析 | 第38-39页 |
| 3.2.10 血凝试验 | 第39页 |
| 3.2.11 血凝抑制试验 | 第39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-48页 |
| 3.3.1 病毒分离结果 | 第39-40页 |
| 3.3.2 VP1与VP2基因PCR扩增与克隆结果 | 第40-42页 |
| 3.3.3 病毒血凝与血凝抑制结果 | 第42-43页 |
| 3.3.4 VP1基因核苷酸同源性分析 | 第43-44页 |
| 3.3.5 VP1基因的遗传进化分析 | 第44-45页 |
| 3.3.6 VP2基因核苷酸同源性分析 | 第45-46页 |
| 3.3.7 VP2基因的遗传进化分析 | 第46-47页 |
| 3.3.8 VP2基因重要氨基酸位点分析 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-52页 |
| 3.4.1 CPV的分离鉴定 | 第48-49页 |
| 3.4.2 CPV的遗传进化分析 | 第49-52页 |
| 第四章 犬细小病毒VP1与VP2基因的原核表达 | 第52-69页 |
| 4.1 材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 主要材料 | 第52页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第52-53页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第53页 |
| 4.1.4 主要试剂的配制 | 第53页 |
| 4.2 方法 | 第53-59页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第53-54页 |
| 4.2.2 VP1与VP2基因PCR扩增 | 第54页 |
| 4.2.3 PCR产物的回收 | 第54页 |
| 4.2.4 VP1与VP2基因重组表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.2.5 重组原核表达质粒的转化 | 第55页 |
| 4.2.6 重组原核表达质粒PCR鉴定 | 第55页 |
| 4.2.7 重组原核表达质粒提取 | 第55页 |
| 4.2.8 重组原核表达质粒酶切鉴定 | 第55-56页 |
| 4.2.9 重组原核表达质粒转化BL21 | 第56页 |
| 4.2.10 重组原核表达质粒的诱导表达 | 第56-57页 |
| 4.2.11 IPTG诱导浓度的优化 | 第57页 |
| 4.2.12 诱导温度的优化 | 第57-58页 |
| 4.2.13 蛋白表达形式分析 | 第58页 |
| 4.2.14 Western Bloting分析 | 第58-59页 |
| 4.3 结果 | 第59-67页 |
| 4.3.1 VP1与VP2基因PCR扩增结果 | 第59页 |
| 4.3.2 VP1与VP2基因重组表达质粒酶切鉴定 | 第59-60页 |
| 4.3.3 重组pET-32a-VP1质粒SDS-PAGE结果 | 第60-61页 |
| 4.3.4 重组pET-32a-VP1质粒诱导浓度的优化 | 第61-62页 |
| 4.3.5 重组pET-32a-VP1质粒诱导温度的优化 | 第62页 |
| 4.3.6 VP1蛋白表达形式分析 | 第62-63页 |
| 4.3.7 重组pET-32a-VP2质粒SDS-PAGE结果 | 第63-64页 |
| 4.3.8 重组pET-32a-VP2质粒诱导浓度的优化 | 第64页 |
| 4.3.9 重组pET-32a-VP2质粒诱导温度的优化 | 第64-65页 |
| 4.3.10 VP2蛋白可溶性分析 | 第65-66页 |
| 4.3.11 VP1与VP2蛋白的Western Blot结果 | 第66-67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-69页 |
| 4.4.1 表达系统的选择 | 第67-68页 |
| 4.4.2 诱导表达条件优化 | 第68页 |
| 4.4.3 目的蛋白的表达形式 | 第68-69页 |
| 第五章 全文结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 附录 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
