| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 鸭肝炎的流行和历史分布 | 第11-12页 |
| 1.1 Ⅰ型鸭肝炎(Duck Hepatitis TypeⅠ) | 第11页 |
| 1.2 Ⅱ型鸭肝炎(Duck Hepatitis TypeⅡ) | 第11页 |
| 1.3 Ⅲ型鸭肝炎(Duck Hepatitis TypeⅢ) | 第11-12页 |
| 1.4 Ⅰ型鸭肝炎变异株或新型鸭肝炎 | 第12页 |
| 2 鸭肝炎的病原特性 | 第12-15页 |
| 2.1 Ⅰ型鸭肝炎 | 第12-14页 |
| 2.2 Ⅱ型鸭肝炎 | 第14页 |
| 2.3 Ⅲ型鸭肝炎 | 第14-15页 |
| 3 Ⅰ型鸭肝炎病毒病的诊断 | 第15-17页 |
| 3.1 Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离和鉴定 | 第15页 |
| 3.2 Ⅰ型鸭肝炎病毒病血清学诊断 | 第15-17页 |
| 3.3 Ⅰ型鸭肝炎病毒病鉴别诊断 | 第17页 |
| 4 Ⅰ型鸭肝炎病毒分子生物研究现状 | 第17-19页 |
| 5 PCR技术的研究进展 | 第19-21页 |
| 5.1 PCR技术的基本原理 | 第19-20页 |
| 5.2 逆转录PCR | 第20-21页 |
| 6 RT-PCR技术在Ⅰ型鸭肝炎病毒病诊断中的应用 | 第21-23页 |
| 第二章 RT-PCR方法检测Ⅰ型鸭肝炎病毒 | 第23-34页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| 1.1 毒株 | 第23页 |
| 1.2 实验动物 | 第23页 |
| 1.3 质粒 | 第23页 |
| 1.4 菌株 | 第23页 |
| 1.5 试剂 | 第23页 |
| 1.6 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-28页 |
| 2.1 病毒的增值和纯化 | 第24页 |
| 2.2 引物设计 | 第24页 |
| 2.3 病毒总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.4 Ⅰ型鸭肝炎病毒目的片段的扩增(RT-PCR) | 第25-26页 |
| 2.5 RT-PCR的敏感性检测 | 第26页 |
| 2.6 RT-PCR的特异性检测 | 第26-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-31页 |
| 3.1 目的片段PCR扩增结果 | 第28-29页 |
| 3.2 RT-PCR的敏感检测 | 第29-30页 |
| 3.3 RT-PCR的特异性检测 | 第30页 |
| 3.4 目的片段的序列测定结果 | 第30-31页 |
| 4 讨论: | 第31-34页 |
| 4.1 Ⅰ型鸭肝炎病毒的引物设计和扩增 | 第31-32页 |
| 4.2 RT-PCR检测方法的灵敏度和特异性 | 第32页 |
| 4.3 RT-PCR检测方法的优越性 | 第32页 |
| 4.4 影响RT-PCR检测结果的因素 | 第32-33页 |
| 4.5 检测方法分析 | 第33-34页 |
| 第三章 Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因克隆与序列分析 | 第34-51页 |
| 1 材料和方法 | 第34页 |
| 1.1 材料 | 第34页 |
| 1.2 主要仪器 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-40页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第34页 |
| 2.2 病毒核酸的提取 | 第34-35页 |
| 2.3 Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的扩增(RT-PCR) | 第35-36页 |
| 2.4 DHV-1(疫苗株)VP1基因的克隆 | 第36-40页 |
| 3 结果和分析 | 第40-48页 |
| 3.1 VP1基因RT-PCR扩增结果 | 第40页 |
| 3.2 VP1基因产物胶回收鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3 重组质粒的酶切鉴定 | 第41页 |
| 3.4 VP1基因测序及序列分析 | 第41-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 小RNA病毒与DHV-Ⅰ的关系 | 第48-49页 |
| 4.2 小RNA病毒基因组的主要结构特点 | 第49页 |
| 4.3 DHV-ⅠVP1基因的克隆测序分析 | 第49-51页 |
| 第四章 Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白理化性质、二级结构及其它生物学特性的预测 | 第51-58页 |
| 1 材料和方法 | 第52页 |
| 1.1 Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白的氨基酸序列 | 第52页 |
| 1.2 VP1蛋白理化性质分析 | 第52页 |
| 1.3 VP1蛋白的二级结构预测 | 第52页 |
| 1.4 VP1蛋白B细胞抗原表位的预测 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-57页 |
| 2.1 VP1蛋白理化性质分析 | 第53页 |
| 2.2 VP1蛋白的二级结构预测 | 第53-54页 |
| 2.3 VP1蛋白抗原肽指数预测 | 第54页 |
| 2.4 VP1蛋白的亲水性预测 | 第54-55页 |
| 2.5 VP1蛋白的表面可能性分析 | 第55-56页 |
| 2.6 VP1蛋白骨架区的柔韧性分析 | 第56页 |
| 2.7 VP1蛋白B细胞抗原表位的预测分析 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录一:pET-32a(+)质粒图谱 | 第64-65页 |
| 附录二:DHV-Ⅰ疫苗株的VP1基因的核苷酸序列 | 第65页 |
| 附录三:DHV-Ⅰ疫苗株的VP1基因的氨基酸序列 | 第65-66页 |
| 附录四:有关试剂和溶液配制 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
