| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 研究背景 | 第10-20页 |
| 1.1.1 β-1,3-葡聚糖酶的基本生物学特性 | 第11-12页 |
| 1.1.2 β-1,3-葡聚糖酶抗病机制研究 | 第12-13页 |
| 1.1.3 β-1,3-葡聚糖酶在植物中的发育调节及其可诱导性 | 第13-15页 |
| 1.1.4 β-1,3-葡聚糖酶基因信息研究 | 第15-17页 |
| 1.1.5 β-1,3-葡聚糖酶基因在植物抗真菌基因工程中的应用 | 第17-19页 |
| 1.1.6 β-1,3-葡聚糖酶的应用前景 | 第19-20页 |
| 1.2 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 酶和试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 培养基及溶液 | 第21-24页 |
| 2.1.5 引物 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-39页 |
| 2.2.1 质粒DNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2 拟南芥叶片DNA提取 | 第25页 |
| 2.2.3 DNA片段回收 | 第25页 |
| 2.2.4 感受态细胞制备及转化 | 第25-26页 |
| 2.2.5 PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第27页 |
| 2.2.7 GST蛋白诱导表达及纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.8 拟南芥转化及筛选 | 第28页 |
| 2.2.9 蛋白的抑菌实验 | 第28-29页 |
| 2.2.10 蛋白的酶活测定 | 第29-30页 |
| 2.2.11 Northern杂交 | 第30-31页 |
| 2.2.12 小麦及拟南芥RNA提取,检测及cDNA第一链的合成 | 第31-34页 |
| 2.2.13 Southern杂交 | 第34-36页 |
| 2.2.14 5′RACE反应 | 第36-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-54页 |
| 3.1 Glu基因的克隆及序列分析 | 第39-40页 |
| 3.1.1 鲜叶中总RNA的提取、检测与cDNA第一链的合成 | 第39页 |
| 3.1.2 cDNA的克隆与测序 | 第39-40页 |
| 3.2 原核表达载体pGEX-Glu载体构建、表达蛋白的鉴定 | 第40-44页 |
| 3.2.1 原核表达载体pGEX-Glu载体构建 | 第40-41页 |
| 3.2.2 原核表达条件试验 | 第41页 |
| 3.2.3 原核表达及蛋白纯化 | 第41-42页 |
| 3.2.4 原核表达蛋白的功能鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.5 酶活测定 | 第43-44页 |
| 3.3 植物表达载体的构建并转化根癌农杆菌 | 第44页 |
| 3.4 拟南芥转化、筛选及鉴定 | 第44-46页 |
| 3.5 Glu基因的表达分析 | 第46-49页 |
| 3.5.1 Northern分析 | 第46-47页 |
| 3.5.2 半定量RT-PCR | 第47-49页 |
| 3.6 Glu基因的Southern分析 | 第49-50页 |
| 3.7 5'RACE反应,克隆与测序 | 第50-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
