| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第14-21页 |
| 第一章 糖基转移酶基因和肌动蛋白解聚因子基因的克隆 | 第21-47页 |
| 1 材料和方法 | 第21-33页 |
| 1.1 试验材料 | 第21-22页 |
| 1.1.1 供试植物材料 | 第21页 |
| 1.1.2 试剂材料 | 第21页 |
| 1.1.3 基因组PCR及RT-PCR引物 | 第21-22页 |
| 1.2 试验方法 | 第22-33页 |
| 1.2.1 基因组DNA的大量提取方法 | 第22页 |
| 1.2.2 总RNA的提取及质量检测方法 | 第22-24页 |
| 1.2.3 GbGAUT1和GbADF1的分离方法 | 第24-27页 |
| 1.2.4 cDNA全长的获得 | 第27-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-43页 |
| 2.1 糖基转移酶8基因家族基因组片段的获得和同源性分析 | 第33-36页 |
| 2.1.1 糖基转移酶8基因家族基因组片段的获得 | 第33-34页 |
| 2.1.2 糖基转移酶8基因家族基因组片段克隆序列的同源性分析 | 第34-36页 |
| 2.1.3 基因组扩增片段的比较分析 | 第36页 |
| 2.2 GbGAUT1基因全长cDNA的获得 | 第36-40页 |
| 2.2.1 海岛棉纤维RNA提取分析 | 第36-37页 |
| 2.2.2 电子拼接和RT-PCR扩增部分cDNA序列 | 第37-39页 |
| 2.2.3 利用 3′RACE获得基因的 3′端 | 第39-40页 |
| 2.2.4 利用 5′RACE获得基因的 5′端 | 第40页 |
| 2.3 GbADF1基因组片段的获得和同源性分析 | 第40-43页 |
| 2.3.1 GbADF1基因组片段的获得 | 第40-41页 |
| 2.3.2 克隆序列的全序列分析 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-46页 |
| 3.1 关于糖基转移酶8基因家族 | 第43页 |
| 3.2 关于全长基因的获得方法 | 第43-44页 |
| 3.3 关于肌动蛋白解聚因子基因结构分析 | 第44-46页 |
| 4 小结 | 第46-47页 |
| 第二章 GbGAUT1和GbADF1的生物信息学分析及表达分析 | 第47-72页 |
| 1 材料和方法 | 第47-49页 |
| 1.1 试验材料 | 第47页 |
| 1.1.1 供试植物材料 | 第47页 |
| 1.1.2 试剂材料 | 第47页 |
| 1.2 试验方法 | 第47-49页 |
| 1.2.1 生物信息学分析方法 | 第47-48页 |
| 1.2.2 Pima90-53棉苗种植 | 第48页 |
| 1.2.3 Pima90-53幼苗根茎叶RNA的提取 | 第48页 |
| 1.2.4 半定量RT-PCR方法 | 第48-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-66页 |
| 2.1 GbGAUT1基因的生物信息学分析 | 第49-57页 |
| 2.1.1 GbGAUT1氨基酸序列分析 | 第49-50页 |
| 2.1.2 蛋白跨膜区域分析 | 第50页 |
| 2.1.3 信号肽分析 | 第50-51页 |
| 2.1.3 亲/疏水性分析 | 第51-52页 |
| 2.1.4 模体预测 | 第52-53页 |
| 2.1.5 二级结构分析 | 第53-54页 |
| 2.1.5 二硫键预测 | 第54-55页 |
| 2.1.6 钙调素结合位点预测 | 第55页 |
| 2.1.7 同源基因系统进化分析 | 第55-57页 |
| 2.2 GbADF1基因的生物信息学分析 | 第57-64页 |
| 2.2.1 氨基酸序列分析 | 第57-58页 |
| 2.2.2 肽链的亲/疏水性分析 | 第58-59页 |
| 2.2.3 蛋白模体分析 | 第59页 |
| 2.2.4 蛋白跨膜区域分析 | 第59-60页 |
| 2.2.4 钙调素结合位点预测 | 第60页 |
| 2.2.5 结构分析 | 第60-61页 |
| 2.2.6 基因同源性和系统进化分析 | 第61-63页 |
| 2.2.7 3-D模型预测 | 第63-64页 |
| 2.3 基因表达特异性分析 | 第64-66页 |
| 2.3.1 cDNA模板浓度和最佳循环数的确定 | 第64页 |
| 2.3.2 GbGAUT1基因表达特异性分析 | 第64-65页 |
| 2.3.3 GbADF1基因表达特异性分析 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-71页 |
| 3.1 关于GbGAUT1与纤维发育关系的分析 | 第66-68页 |
| 3.2 关于生物信息学分析 | 第68-69页 |
| 3.3 关于半定量RT-PCR | 第69页 |
| 3.4 关于GbADF1与纤维长度的关系及其氨基酸序列分析 | 第69-71页 |
| 4 小结 | 第71-72页 |
| 第三章 原核表达载体的构建及表达检测 | 第72-86页 |
| 1 材料和方法 | 第72-78页 |
| 1.1 试验材料 | 第72页 |
| 1.2 试验方法 | 第72-78页 |
| 1.2.1 GbGAUT1基因原核表达载体的构建方法 | 第72-74页 |
| 1.2.2 GbADF1基因原核表达载体的构建方法 | 第74-76页 |
| 1.2.3 重组蛋白的诱导表达方法 | 第76-77页 |
| 1.2.4 SDS-PAGE电泳 | 第77页 |
| 1.2.5 剥胶 | 第77页 |
| 1.2.6 固定和染色 | 第77页 |
| 1.2.7 凝胶的脱色 | 第77-78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-83页 |
| 2.1 GbGAUT1基因原核表达 | 第78-80页 |
| 2.1.1 GbGAUT1原核表达载体的构建 | 第78-79页 |
| 2.1.2 GbGAUT1原核诱导表达分析 | 第79-80页 |
| 2.2 GbADF1基因原核表达 | 第80-83页 |
| 2.2.1 GbADF1原核表达载体的构建 | 第80页 |
| 2.2.2 原核表达载体和目标基因的连接 | 第80-81页 |
| 2.2.3 GbADF1原核诱导表达分析 | 第81-83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| 4 小结 | 第85-86页 |
| 第四章 真核表达载体的构建及遗传转化 | 第86-103页 |
| 1 材料和方法 | 第86-95页 |
| 1.1 试验材料 | 第86页 |
| 1.2 试验方法 | 第86-95页 |
| 1.2.1 GbGAUT1基因真核表达载体的构建方法 | 第86-88页 |
| 1.2.2 GbADF1基因真核表达载体的构建方法 | 第88-90页 |
| 1.2.3 真核表达载体的农杆菌转化方法 | 第90-91页 |
| 1.2.4 遗传转化材料的获得 | 第91-93页 |
| 1.2.4 农杆菌转化拟南芥 | 第93页 |
| 1.2.5 农杆菌转化烟草 | 第93-94页 |
| 1.2.6 农杆菌转化棉花胚性愈伤 | 第94-95页 |
| 2 结果与分析 | 第95-101页 |
| 2.1 GbGAUT1基因真核表达载体的构建 | 第95-96页 |
| 2.1.1 GbGAUT1中间重组子的构建 | 第95-96页 |
| 2.1.2 真核表达载体和目的基因的连接 | 第96页 |
| 2.2 GbADF1基因真核表达载体的构建 | 第96-98页 |
| 2.2.1 GbADF1中间重组子的构建 | 第96-97页 |
| 2.2.2 真核表达载体和目的基因的连接 | 第97-98页 |
| 2.3 农杆菌的鉴定 | 第98-99页 |
| 2.4 烟草遗传转化植株的获得 | 第99页 |
| 2.5 棉花胚性愈伤和再生植株的获得 | 第99-101页 |
| 3 讨论 | 第101-102页 |
| 4 小结 | 第102-103页 |
| 结论 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-112页 |
| 附录I 试验所用试剂配方 | 第112-115页 |
| 附录II RACE原理示意图 | 第115-116页 |
| 附录III 试验中所用载体结构示意图 | 第116-117页 |
| 附录IV | 第117-118页 |
| 在读期间发表论文 | 第118-119页 |
| 作者简历 | 第119-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 附件 | 第122页 |
