| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 插图目录 | 第14-15页 |
| 表格目录 | 第15-16页 |
| 略语表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-37页 |
| 1 microRNA (miRNA)与肿瘤 | 第17-22页 |
| ·miRNA 概述 | 第17-19页 |
| ·miRNA 的生物学特征 | 第17页 |
| ·miRNA 的加工和作用机制 | 第17-19页 |
| ·miRNA 的生物学功能 | 第19页 |
| ·miRNA 与肿瘤相关性研究进展 | 第19-22页 |
| ·miRNA 与肿瘤发生 | 第19-21页 |
| ·miRNA 与肿瘤诊断 | 第21-22页 |
| ·miRNA 与肿瘤的基因治疗 | 第22页 |
| 2 乳腺癌及其相关miRNA 的研究进展 | 第22-28页 |
| ·乳腺癌研究进展 | 第22-23页 |
| ·乳腺癌中miRNA 的差异性表达 | 第23-24页 |
| ·乳腺癌相关基因表达与miRNA 调控 | 第24-28页 |
| ·乳腺癌细胞的分化、增值与凋亡 | 第24-25页 |
| ·乳腺癌的侵袭转移 | 第25页 |
| ·缺氧与耐药 | 第25-26页 |
| ·激素受体和细胞因子介导的信号转导通路 | 第26-28页 |
| 3 血清miRNA 与肿瘤标记物 | 第28-30页 |
| 4 研究肿瘤miRNA 的主要方法 | 第30-37页 |
| ·遗传学方法 | 第30-31页 |
| ·Northern 印记杂交(Nother Blot) | 第31页 |
| ·基因芯片(miRNA microarray) | 第31页 |
| ·real-time PCR | 第31-33页 |
| ·real-time PCR 的原理 | 第32页 |
| ·real-time PCR 的特点 | 第32-33页 |
| ·real-time PCR 的应用 | 第33页 |
| ·miRNA 潜在靶标的预测 | 第33-37页 |
| ·生物信息学预测 | 第34-35页 |
| ·mRNA 表达芯片 | 第35-37页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第37-39页 |
| 1 研究目的和意义 | 第37页 |
| 2 研究主要内容 | 第37-38页 |
| 3 实验流程图 | 第38-39页 |
| 第三章 材料与方法 | 第39-59页 |
| 1 材料 | 第39-45页 |
| ·乳腺组织与血清样本 | 第39-40页 |
| ·主要仪器及材料 | 第40-41页 |
| ·反转录茎环引物及PCR 引物 | 第41-42页 |
| ·试剂及其来源 | 第42-45页 |
| 2 方法 | 第45-59页 |
| ·乳腺癌组织样本的免疫组化 | 第45-46页 |
| ·血清样本制备 | 第46页 |
| ·总RNA 样本制备 | 第46-48页 |
| ·乳腺组织总RNA 抽提 | 第46-47页 |
| ·乳腺血清总RNA 抽提 | 第47页 |
| ·总RNA 的定量和完整性检测 | 第47-48页 |
| ·目标miRNA 的筛选 | 第48-49页 |
| ·miRNA 茎环引物及PCR 引物设计 | 第49-50页 |
| ·引物设计方法与原则 | 第49页 |
| ·引物特异性的验证与分析 | 第49-50页 |
| ·miRNA 表达的检测和分析 | 第50-57页 |
| ·cDNA 第一链的合成（RT） | 第50-51页 |
| ·PCR 反应 | 第51-52页 |
| ·PCR 产物加接头的连接反应 | 第52页 |
| ·连接产物回收、富集与纯化 | 第52-53页 |
| ·构建质粒载体的连接反应 | 第53-54页 |
| ·重组质粒转化 | 第54-55页 |
| ·重组质粒筛选与鉴定 | 第55-56页 |
| ·序列测定及分析 | 第56-57页 |
| ·miRNA 表达的定量分析 | 第57-58页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第57页 |
| ·荧光定量PCR 过程 | 第57-58页 |
| ·数据处理及统计分析 | 第58页 |
| ·miRNA 潜在靶标的预测 | 第58-59页 |
| 第四章 结果与分析 | 第59-89页 |
| 1 乳腺癌组织样本的免疫组化分析 | 第59页 |
| 2 总RNA 样本的质量分析 | 第59-63页 |
| 3 miRNA 在乳腺组织和血清中表达的检测与分析 | 第63-66页 |
| ·miRNA 基因的扩增（RT-PCR） | 第63页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第63-64页 |
| ·miRNA 基因的测序验证结果 | 第64-65页 |
| ·引物特异性的验证与分析 | 第65-66页 |
| 4 乳腺肿瘤组织中miRNA 的差异性表达分析 | 第66-70页 |
| ·miRNA 在乳腺癌组织及其癌旁正常组织中表达的差异性分析 | 第66-67页 |
| ·miRNA 在乳腺组织中的表达在患病年龄上的差异性分析 | 第67-68页 |
| ·miRNA 在乳腺组织中的表达在病理分级上的差异性分析 | 第68-69页 |
| ·miRNA 在乳腺组织中的表达在激素受体表达量上的差异性分析 | 第69-70页 |
| 5 血清中miRNA 的表达与性别的相关性 | 第70-72页 |
| 6 乳腺肿瘤患者血清中miRNA 的差异性表达分析 | 第72-76页 |
| ·miRNA 在乳腺癌血清与正常血清中表达的差异性分析 | 第73页 |
| ·miRNA 在血清中的表达在患病年龄上的差异性分析 | 第73-74页 |
| ·miRNA 在血清中的表达在病理分级上的差异性分析 | 第74-75页 |
| ·miRNA 在血清中的表达在激素受体表达量上的差异性分析 | 第75-76页 |
| 7 乳腺组织和血清中miRNA 表达的相似性分析 | 第76-81页 |
| ·患病年龄上的相似性分析 | 第76-78页 |
| ·病理分级上的相似性分析 | 第78-80页 |
| ·雌、孕激素受体表达量上的相似性分析 | 第80-81页 |
| 8 miRNA 在血清和组织中表达的相关性分析 | 第81页 |
| 9 miRNA 的差异性表达指示各病理特征 | 第81-85页 |
| 10 miRNA 潜在靶标的预测结果 | 第85-89页 |
| 第五章 讨论 | 第89-94页 |
| 1 miRNA 作为乳腺肿瘤血清学分子标记物 | 第89-91页 |
| ·miRNA 作为乳腺癌分子标记物的意义 | 第89页 |
| ·miRNA 在血清中的稳定性与表达 | 第89-90页 |
| ·miRNA 在组织与血清中表达的相关性 | 第90-91页 |
| 2 基于荧光定量PCR 技术检测血清miRNA | 第91-92页 |
| 3 目标miRNA 指示乳腺肿瘤病理特征 | 第92-93页 |
| ·目标miRNA 指示临床病理分级 | 第92页 |
| ·目标miRNA 指示激素受体表达量 | 第92-93页 |
| 4 miRNA 及其潜在靶标研究意义 | 第93-94页 |
| 第六章 总结与展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 附录一 重要试剂的配制 | 第102-104页 |
