| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 南方水稻黑条矮缩病毒的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.1.1 南方水稻黑条矮缩病的发生及危害 | 第10页 |
| 1.1.2 南方水稻黑条矮缩病的发病症状 | 第10-11页 |
| 1.1.3 SRBSDV的寄主和传播介体 | 第11页 |
| 1.1.4 南方水稻黑条矮缩病的防治对策 | 第11-12页 |
| 1.1.5 SRBSDV的粒体特性 | 第12页 |
| 1.1.6 SRBSDV的分类地位 | 第12-13页 |
| 1.1.7 SRBSDV的基因组结构与功能 | 第13-14页 |
| 1.2 植物病毒的病毒原质形成机制的研究 | 第14-15页 |
| 1.3 杆状病毒真核表达系统的研究概况及其应用 | 第15-18页 |
| 1.3.1 杆状病毒表达系统的原理 | 第15-17页 |
| 1.3.2 杆状病毒表达系统的特点 | 第17页 |
| 1.3.3 杆状病毒表达系统的应用 | 第17-18页 |
| 1.4 酵母双杂交技术 | 第18-19页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-33页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 材料来源 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-33页 |
| 2.2.1 SRBSDV P5、P6、P9-1的Bacmid重组穿梭载体的构建 | 第21-29页 |
| 2.2.1.1 水稻病叶总RNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.1.2 SRBSDV P5、P6、P9-1的cDNA合成 | 第21-22页 |
| 2.2.1.3 PCR扩增SRBSDV P5、P6、P9-1三个目的基因 | 第22-23页 |
| 2.2.1.4 SRBSDV P5、P6、P9-1基因的电泳检测及切胶纯化回收 | 第23页 |
| 2.2.1.5 SRBSDV P5、P6和P9-1连接到平末端克隆载体pEASYTM-Blunt SimpleCloning Vector上 | 第23-24页 |
| 2.2.1.6 连接产物转化至大肠杆菌DH5α | 第24页 |
| 2.2.1.7 阳性克隆的鉴定筛选 | 第24-26页 |
| 2.2.1.8 目的基因连接到pFastBac1载体上 | 第26-27页 |
| 2.2.1.9 目的载体转化大肠杆菌DH10Bac | 第27-28页 |
| 2.2.1.11 Bacmid重组穿梭载体的质粒PCR验证 | 第28-29页 |
| 2.2.2 获得分别含有Bacmid-SRBSDV-P5、P6、P9-1的病毒上清 | 第29-30页 |
| 2.2.2.1 Sf9细胞的培养 | 第29页 |
| 2.2.2.2 重组穿梭质粒Bacmid-SRBSDV-P5、P6、P9-1转染Sf9细胞 | 第29-30页 |
| 2.2.2.3 病毒上清的收集 | 第30页 |
| 2.2.3 免疫荧光方法检测被侵染的Sf9细胞 | 第30-31页 |
| 2.2.4 抗体与荧光素的交联 | 第31页 |
| 2.2.5 利用酵母双杂交技术验证蛋白之间的互作 | 第31-33页 |
| 2.2.5.1 目的基因的扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.5.2 酵母表达载体的构建 | 第32页 |
| 2.2.5.3 NMY51酵母感受态细胞的制备和重组质粒共转化酵母感受态细胞 | 第32页 |
| 2.2.5.4 蛋白互作的检测 | 第32-33页 |
| 2.2.5.5 β-半乳糖苷酶活性分析 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-41页 |
| 3.1 重组杆状病毒表达载体的构建 | 第33-36页 |
| 3.1.1 RT-PCR扩增SRBSDV的P5、P6和P9-1基因 | 第33-34页 |
| 3.1.2 克隆载体的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 3.1.3 目的载体pFastBac1的PCR鉴定 | 第35页 |
| 3.1.4 重组杆状病毒表达载体的PCR鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2 Sf9细胞的培养 | 第36页 |
| 3.3 SRBSDVP5、P6和P9-1在Sf9细胞中的表达 | 第36-39页 |
| 3.4 利用酵母双杂交技术验证P5、P6和P9-1三者之间的互作关系 | 第39-41页 |
| 3.4.1 酵母载体的构建 | 第39页 |
| 3.4.2 酵母双杂交验证蛋白之间的互作 | 第39-40页 |
| 3.4.3 β-半乳糖苷酶活性分析 | 第40-41页 |
| 3.5 小结 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-46页 |
| 4.1 呼肠孤病毒科中viroplasm的形成机制 | 第41-42页 |
| 4.2 SRBSDV侵染细胞诱导viroplasm的形成机制 | 第42-44页 |
| 4.3 蛋白体外表达体系的选择 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录1 所用主要试剂及缓冲液的配置 | 第52-58页 |
| 附录2 所用载体图谱 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
