| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩写一览表 | 第12-13页 |
| 1.引言 | 第13-23页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-19页 |
| 1.1.1 肝癌治疗现状 | 第13页 |
| 1.1.2 肝癌与SIRT1 | 第13-14页 |
| 1.1.3 SIRT1的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.1.4 SIRT1的酶学功能 | 第15-17页 |
| 1.1.5 Tipranavir的研究进展 | 第17页 |
| 1.1.6 CYP3A4的酶学功能 | 第17-18页 |
| 1.1.7 计算机辅助药物设计 | 第18-19页 |
| 1.1.8 反向分子对接 | 第19页 |
| 1.2 研究目的及意义 | 第19页 |
| 1.3 研究内容及拟解决的关键问题 | 第19-21页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.3.2 拟解决的关键问题 | 第20-21页 |
| 1.4 主要技术路线 | 第21-23页 |
| 2.Tipranavir与受体蛋白的相互作用研究 | 第23-29页 |
| 2.1 Tipranavir与蛋白晶体的对接 | 第23页 |
| 2.1.1 实验数据来源 | 第23页 |
| 2.1.2 实验软件 | 第23页 |
| 2.2 实验流程及方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 受体蛋白的选择及处理 | 第23页 |
| 2.2.2 对接方法的选择 | 第23页 |
| 2.2.3 小分子化合物的处理 | 第23-24页 |
| 2.2.4 Tipranavir和受体蛋白的对接 | 第24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-27页 |
| 2.3.1 受体蛋白的选择及处理 | 第24-25页 |
| 2.3.2 基于Surflex-Dock的对接 | 第25-26页 |
| 2.3.3 基于Ligand Fit docking的对接 | 第26-27页 |
| 2.4 实验结果分析 | 第27-29页 |
| 3.HepG2基因敲除细胞株的构建和验证 | 第29-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 主要试剂耗材 | 第29页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第29-30页 |
| 3.1.3 主要试剂配制 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-36页 |
| 3.2.1 敲除质粒构建 | 第30-34页 |
| 3.2.2 病毒制备 | 第34页 |
| 3.2.3 目的细胞转染 | 第34-35页 |
| 3.2.4 敲除结果验证 | 第35-36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-39页 |
| 3.3.1 敲除结果验证 | 第36-37页 |
| 3.3.2 嘌呤霉素筛选结果 | 第37-39页 |
| 3.4 实验结果分析 | 第39-41页 |
| 4.单克隆筛选及验证 | 第41-49页 |
| 4.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 主要实验材料 | 第41页 |
| 4.1.2 主要试剂耗材 | 第41页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-46页 |
| 4.2.1 单克隆筛选 | 第42-44页 |
| 4.2.2 敲除结果验证 | 第44-46页 |
| 4.3 实验结果 | 第46-48页 |
| 4.3.1 96 孔板筛选单菌落细胞 | 第46页 |
| 4.3.2 24 孔板克隆化培养 | 第46-47页 |
| 4.3.3 蛋白免疫印迹验证筛选结果 | 第47-48页 |
| 4.4 实验结果分析 | 第48-49页 |
| 5.Tipranavir对肝癌细胞的增殖抑制效应 | 第49-59页 |
| 5.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 5.1.1 主要实验材料 | 第49页 |
| 5.1.2 主要试剂耗材 | 第49页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第49-50页 |
| 5.1.4 主要溶液配制 | 第50页 |
| 5.2 实验方法 | 第50-53页 |
| 5.2.1 细胞复苏 | 第50页 |
| 5.2.2 细胞培养 | 第50-51页 |
| 5.2.3 细胞传代 | 第51页 |
| 5.2.4 细胞冻存 | 第51页 |
| 5.2.5 血球计数板计数 | 第51-52页 |
| 5.2.6 CCK-8 法测细胞增殖抑制 | 第52-53页 |
| 5.3 实验结果 | 第53-57页 |
| 5.3.1 Tipranavir和EX527对HepG2及其敲除细胞的增殖抑制作用 | 第53页 |
| 5.3.2 EX527对HepG2及其敲除细胞的增殖抑制作用 | 第53-54页 |
| 5.3.3 Tipranavir对HepG2及其敲除细胞的增殖抑制作用 | 第54-55页 |
| 5.3.4 Tipranavir对HepG2、L02细胞的增殖抑制 | 第55页 |
| 5.3.5 EX527和Tipranavir处理肝癌细胞 48h后细胞生长状态 | 第55-57页 |
| 5.4 实验结果分析 | 第57-59页 |
| 6.反向分子对接 | 第59-65页 |
| 6.1 基于Tipranavir的反向分子研究 | 第59页 |
| 6.1.1 实验数据来源 | 第59页 |
| 6.1.2 实验软件 | 第59页 |
| 6.2 实验流程及方法 | 第59-61页 |
| 6.2.1 反向分子对接 | 第59-60页 |
| 6.2.2 选取与肝癌相关的靶蛋白 | 第60页 |
| 6.2.3 正向分子对接 | 第60-61页 |
| 6.3 实验结果 | 第61-62页 |
| 6.3.1 受体蛋白的选择及处理 | 第61页 |
| 6.3.2 基于Surflex-Dock的分子对接结果 | 第61-62页 |
| 6.4 实验结果分析 | 第62-65页 |
| 7.全文总结 | 第65-67页 |
| 7.1 课题概述 | 第65-66页 |
| 7.2 课题创新点 | 第66页 |
| 7.3 课题存在的问题 | 第66页 |
| 7.4 课题展望 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 个人简历、在校期间发表的学术论文及取得的研究成果 | 第73页 |
