| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第11页 |
| 1.2 鸡性腺发育相关基因的研究 | 第11-14页 |
| 1.2.1 鸡睾丸发育相关基因 | 第12-13页 |
| 1.2.2 鸡卵巢发育相关基因 | 第13-14页 |
| 1.3 miRNAs在动物性腺发育中的作用 | 第14-15页 |
| 1.3.1 哺乳动物中与性腺发育相关的miRNA | 第14-15页 |
| 1.3.2 鸡中与性腺发育相关的miRNA | 第15页 |
| 1.4 miR-2954 在鸟类中的研究 | 第15-16页 |
| 1.5 miRNA的功能研究方法 | 第16-17页 |
| 1.5.1 化学合成法 | 第16-17页 |
| 1.5.2 表达载体构建法 | 第17页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第17-19页 |
| 2 试验材料与方法 | 第19-40页 |
| 2.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.1.1 样品 | 第19页 |
| 2.1.2 细胞系和质粒 | 第19页 |
| 2.2 主要仪器、试剂和溶液配制 | 第19-23页 |
| 2.2.1 主要仪器与设备 | 第19-20页 |
| 2.2.2 主要试剂和试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.2.3 溶液配制 | 第21-22页 |
| 2.2.4 生物信息学分析相关的软件和数据库 | 第22-23页 |
| 2.3 试验方法 | 第23-40页 |
| 2.3.1 鸡胚DNA的提取与性别鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.2 细胞制备与培养 | 第24-26页 |
| 2.3.3 定量检测不同细胞miR-2954 的表达 | 第26-29页 |
| 2.3.4 miR-2954 超表达载体的构建 | 第29-33页 |
| 2.3.5 miR-2954 超表达载体效果检测 | 第33-34页 |
| 2.3.6 miR-2954 对细胞周期的影响 | 第34-35页 |
| 2.3.7 双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第35-38页 |
| 2.3.8 双荧光素酶报告系统的验证 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-54页 |
| 3.1 miR-2954 在不同性别细胞中的表达 | 第40-42页 |
| 3.1.1 样品性别鉴定与细胞RNA的提取及反转录 | 第40-41页 |
| 3.1.2 miR-2954 表达的定量检测 | 第41-42页 |
| 3.2 miR-2954 超表达载体的构建及效果检测 | 第42-46页 |
| 3.2.1 miR-2954 超表达载体的构建与鉴定 | 第42-44页 |
| 3.2.2 细胞水平miR-2954 超表达效果检测 | 第44-46页 |
| 3.3 miR-2954 超表达对细胞周期的影响 | 第46-48页 |
| 3.4 miR-2954 靶基因分析及验证 | 第48-54页 |
| 3.4.1 miR-2954 候选靶基因的分析 | 第48-50页 |
| 3.4.2 双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第50-52页 |
| 3.4.3 双荧光素酶报告系统检测 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-59页 |
| 4.1 miR-2954 在不同性别细胞中的表达 | 第54页 |
| 4.2 构建慢病毒重组表达载体以实现miR-2954 的超表达 | 第54-55页 |
| 4.3 miR-2954 的靶基因鉴定 | 第55-56页 |
| 4.4 miR-2954 与靶基因SF1、VLDL的调控关系 | 第56-57页 |
| 4.5 miR-2954 调控细胞增殖 | 第57-59页 |
| 5 小结 | 第59-60页 |
| 5.1 本研究所取得的结果 | 第59页 |
| 5.2 本研究不足之处与下一步工作的建议 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
