| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-38页 |
| 1.1 桑花叶卷叶病的历史记载 | 第13-14页 |
| 1.2 桑花叶卷叶病的症状及发生情况 | 第14-15页 |
| 1.3 桑花叶卷叶病的病原的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.4 桑树病毒的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5 线虫传多面体病毒属病毒的研究 | 第17-26页 |
| 1.5.1 线虫传多面体病毒属病毒的分类地位及分类依据 | 第17-19页 |
| 1.5.2 线虫传多面体病毒的基因组结构特征与功能 | 第19-23页 |
| 1.5.3 线虫传多面体病毒的传播途径 | 第23页 |
| 1.5.4 线虫传多面体病毒的检测 | 第23-26页 |
| 1.6 植物病毒卫星RNA的研究 | 第26-29页 |
| 1.6.1 植物病毒卫星RNA的分类 | 第26-27页 |
| 1.6.2 环状单链卫星RNA的二级结构 | 第27页 |
| 1.6.3 环状单链卫星RNA的复制 | 第27-29页 |
| 1.7 类病毒的研究 | 第29-35页 |
| 1.7.1 类病毒的分类、结构 | 第30-31页 |
| 1.7.2 类病毒的复制、移动和传播 | 第31-32页 |
| 1.7.3 类病毒的检测 | 第32-35页 |
| 1.8 环状单链卫星RNA与类病毒的区别 | 第35-36页 |
| 1.9 小分子环状RNA侵染性克隆 | 第36页 |
| 1.10 本研究的目的和意义 | 第36-38页 |
| 2 桑花叶卷叶病叶中一种新发现的病毒的研究 | 第38-77页 |
| 2.1 材料和方法 | 第39-54页 |
| 2.1.1 样品的采集 | 第39页 |
| 2.1.2 试剂和菌株 | 第39页 |
| 2.1.3 桑叶总RNA提取 | 第39-40页 |
| 2.1.4 病毒dsRNA的提取 | 第40-41页 |
| 2.1.5 粗提纯病毒样品的制备及电子显微镜观察 | 第41页 |
| 2.1.6 病毒RNA的提取 | 第41页 |
| 2.1.7 引物合成 | 第41-42页 |
| 2.1.8 随机锚定引物RT-PCR扩增病毒基因组 | 第42-43页 |
| 2.1.9 5',3'-RACE | 第43-46页 |
| 2.1.10 序列分析 | 第46-48页 |
| 2.1.11 RT-PCR检测 | 第48-49页 |
| 2.1.12 琼脂糖凝胶电泳分析 | 第49页 |
| 2.1.13 Western blot | 第49-50页 |
| 2.1.14 MMLRaV抗血清的制备 | 第50-53页 |
| 2.1.15 生物接种实验 | 第53-54页 |
| 2.2 结果 | 第54-72页 |
| 2.2.1 粗提纯病毒样品的电子显微镜观察 | 第54-55页 |
| 2.2.2 桑叶总RNA的质量检测 | 第55页 |
| 2.2.3 cDNA合成和锚定随机引物的扩增 | 第55-56页 |
| 2.2.4 5',3'-RACE | 第56-58页 |
| 2.2.5 病毒基因组序列分析 | 第58-63页 |
| 2.2.6 运动蛋白和外壳蛋白之间的切割位点 | 第63-65页 |
| 2.2.7 MMLRaV基因组RNA1和RNA2的3'-UTR核苷酸序列分析 | 第65页 |
| 2.2.8 生物接种实验 | 第65-66页 |
| 2.2.9 大田中MMLRaV的RT-PCR检测 | 第66-67页 |
| 2.2.10 MMLRaV抗血清的制备 | 第67-72页 |
| 2.3 讨论 | 第72-77页 |
| 3 桑花叶卷叶病叶中一种小分子环状RNA的研究 | 第77-108页 |
| 3.1 材料和方法 | 第77-90页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第77-78页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第78页 |
| 3.1.3 桑树中小分子RNA的提取 | 第78-79页 |
| 3.1.4 5%往返聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第79页 |
| 3.1.5 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第79页 |
| 3.1.6 mscRNA的纯化 | 第79页 |
| 3.1.7 mscRNA的分子量大小评估 | 第79-80页 |
| 3.1.8 引物的合成 | 第80页 |
| 3.1.9 mscRNA的cDNA合成、克隆和测序 | 第80-83页 |
| 3.1.10 两步法RT-PCR | 第83-84页 |
| 3.1.11 单管一步RT-PCR | 第84-85页 |
| 3.1.12 PCR产物纯化、重组质粒的构建、重组质粒的提取 | 第85页 |
| 3.1.13 DIG标记的RNA探针的制备 | 第85页 |
| 3.1.14 Dot blot和Northern blot杂交 | 第85-86页 |
| 3.1.15 mscRNA二级结构及锤头型核酶结构预测 | 第86页 |
| 3.1.16 mscRNA侵染性克隆的构建 | 第86-89页 |
| 3.1.17 mscRNA的接种 | 第89-90页 |
| 3.2 结果与分析 | 第90-104页 |
| 3.2.1 mscRNA的2D-PAGE分析及纯化 | 第90页 |
| 3.2.2 mscRNA的分子量大小评估 | 第90-91页 |
| 3.2.3 mscRNA分子的cDNA合成、克隆及测序 | 第91-93页 |
| 3.2.4 mscRNA链极性的确定以及二级结构预测 | 第93-94页 |
| 3.2.5 mscRNA正链上的锤头型核酶 | 第94-97页 |
| 3.2.6 mscRNA序列多样性分析 | 第97-98页 |
| 3.2.7 mscRNA侵染性克隆的构建 | 第98页 |
| 3.2.8 mscRNA的生物学鉴定 | 第98页 |
| 3.2.9 单管一步RT-PCR检测体系的建立 | 第98-100页 |
| 3.2.10 单管一步RT-PCR、Dot blot和Northern blot在mscRNA检测中的应用 | 第100-104页 |
| 3.3 讨论 | 第104-108页 |
| 全文总结 | 第108-111页 |
| 1 桑花叶卷叶病叶中一种新病毒的研究 | 第108-109页 |
| 2 桑小分子环状RNA的研究 | 第109页 |
| 3 今后研究的重点及展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-124页 |
| 附录1 缩略词 | 第124-125页 |
| 附录2 MMLRaV RNA1和RNA2的序列 | 第125-131页 |
| 附录3 分子生物学试剂购置及通用试剂的配制 | 第131-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
