| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1.1 棉花枯萎病相关的研究 | 第12-13页 |
| 1.1.1 棉花枯萎病的概述 | 第12页 |
| 1.1.2 棉花枯萎病菌的类型 | 第12-13页 |
| 1.2 植物抗病机制与信号传导 | 第13-18页 |
| 1.2.1 植物抗病机制 | 第13-14页 |
| 1.2.2 植物抗病信号传导 | 第14-18页 |
| 1.3 NPR1 基因的研究现状 | 第18-21页 |
| 1.3.1 NPR1 基因的结构 | 第18页 |
| 1.3.2 NPR1 基因的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.3.3 NPR1 基因在植物信号转导中的作用 | 第19-21页 |
| 1.4 棉花转基因的主要方法 | 第21-27页 |
| 1.4.1 农杆菌介导法 | 第21-23页 |
| 1.4.2 花粉管通道法 | 第23-27页 |
| 1.4.3 基因枪法 | 第27页 |
| 1.5 选题的背景、目的及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 棉花 GbNPR1 基因的克隆和生物信息学分析 | 第28-39页 |
| 2.1 材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 棉花材料及菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 培养基 | 第28-29页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第29页 |
| 2.1.5 引物 | 第29-30页 |
| 2.2 方法 | 第30-33页 |
| 2.2.1 枯萎病菌的培养 | 第30页 |
| 2.2.2 棉花幼苗的种植与处理 | 第30页 |
| 2.2.3 棉花总 RNA 的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.4 RNA 质量检测 | 第31页 |
| 2.2.5 cDNA 第一链的合成 | 第31页 |
| 2.2.6 GbNPR1 基因的 PCR 扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.7 PCR 产物的回收 | 第32页 |
| 2.2.8 PCR 产物与载体的连接 | 第32-33页 |
| 2.2.9 大肠杆菌热击转化及阳性克隆筛选与测序 | 第33页 |
| 2.2.10 生物信息学分析 | 第33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-37页 |
| 2.3.1 RNA 的提取及质量检测 | 第33页 |
| 2.3.2 GbNPR1 基因的克隆及序列分析 | 第33-35页 |
| 2.3.3 GbNPR1 基因预测蛋白的基本理化性质及蛋白结构分析 | 第35-36页 |
| 2.3.4 GbNPR1 基因的系统进化树分析及功能域同源比对 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 GbNPR1 基因表达特性研究 | 第39-44页 |
| 3.1 材料 | 第39页 |
| 3.1.1 棉花材料及菌株 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂及仪器 | 第39页 |
| 3.1.3 引物 | 第39页 |
| 3.2 方法 | 第39-40页 |
| 3.2.1 棉花幼苗的种植与处理 | 第39-40页 |
| 3.2.2 棉花总 RNA 的提取及 cDNA 第一链的合成 | 第40页 |
| 3.2.3 Real-time PCR 分析 | 第40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-42页 |
| 3.3.1 枯萎病菌诱导后 GbNPR1 的表达分析 | 第40-41页 |
| 3.3.2 水杨酸和乙烯诱导对 GbNPR1 表达的影响 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 GbNPR1 表达载体的构建和农杆菌介导的茎尖转化 | 第44-55页 |
| 4.1 材料 | 第44-46页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第44页 |
| 4.1.2 菌株与载体 | 第44页 |
| 4.1.3 主要仪器及试剂 | 第44页 |
| 4.1.4 培养基类型及配制方法 | 第44-45页 |
| 4.1.5 引物 | 第45-46页 |
| 4.2 方法 | 第46-50页 |
| 4.2.1 植物过表达载体的构建 | 第46-47页 |
| 4.2.2 农杆菌介导的海岛棉茎尖转化 | 第47-49页 |
| 4.2.3 转基因棉花的 PCR 鉴定 | 第49-50页 |
| 4.2.4 半定量 RT-PCR 检测 GbNPR1 基因的表达 | 第50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-54页 |
| 4.3.1 植物过表达载体的构建及转化农杆菌 | 第50-52页 |
| 4.3.2 农杆菌介导海岛棉茎尖的遗传转化 | 第52页 |
| 4.3.3 转基因棉花的 PCR 检测 | 第52-53页 |
| 4.3.4 GbNPR1 基因在枯萎病菌诱导下的表达分析 | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 利用农杆菌侵染花柱头法和农杆菌注射花苞法进行海岛棉遗传转化 | 第55-62页 |
| 5.1 试验材料 | 第55页 |
| 5.1.1 植物材料与菌株 | 第55页 |
| 5.1.2 试剂 | 第55页 |
| 5.2 试验方法 | 第55-57页 |
| 5.2.1 菌液的制备 | 第55页 |
| 5.2.2 菌液的活化 | 第55页 |
| 5.2.3 农杆菌侵染花柱头法和注射花苞法转化目的基因 | 第55-56页 |
| 5.2.4 转基因植株的温室卡那霉素检测 | 第56页 |
| 5.2.5 抗性植株的 PCR 检测 | 第56-57页 |
| 5.3 结果与分析 | 第57-60页 |
| 5.3.1 转化方式对三个品种 T0代成铃率的影响 | 第57页 |
| 5.3.2 转基因后代的检测 | 第57-60页 |
| 5.4 讨论 | 第60-62页 |
| 5.4.1 不同转化方法对成铃率的影响 | 第60页 |
| 5.4.2 农杆菌侵染对卡那霉素检测的影响 | 第60-61页 |
| 5.4.3 两种方法转化效率的分析 | 第61-62页 |
| 第六章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73-74页 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第74页 |
