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衣原体噬菌体PhiCPG1衣壳蛋白Vp1对沙眼衣原体作用机制研究

中文摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
缩略语/符号说明第11-13页
前言第13-22页
    研究现状、成果第13-20页
    研究目的、方法第20-22页
一、衣原体噬菌体PHICPG1衣壳蛋白VP1对沙眼衣原体作用MEK/ERK通路的研究第22-69页
    1.1 材料和方法第22-41页
        1.1.1 细菌、细胞、沙眼衣原体第22页
        1.1.2 试剂耗材及液体配制第22-24页
        1.1.3 仪器与耗材第24页
        1.1.4 实验方法第24-41页
            1.1.4.1 McCoy细胞的培养第24-25页
                1.1.4.1.1 McCoy细胞的复苏第24-25页
                1.1.4.1.2 McCoy细胞的传代第25页
                1.1.4.1.3 McCoy细胞的冻存第25页
            1.1.4.2 沙眼衣原体的培养第25-28页
                1.1.4.2.1 沙眼衣原体的提取第25-26页
                1.1.4.2.2 沙眼衣原体的接种第26页
                1.1.4.2.3 沙眼衣原体的收集(标准株 44‐48h,临床株 60‐72h)第26页
                1.1.4.2.4 沙眼衣原体的纯化第26-27页
                1.1.4.2.5 沙眼衣原体的定量第27-28页
            1.1.4.3 Vp1的表达、鉴定与纯化第28-32页
                1.1.4.3.1 Vp1蛋白的表达第28-29页
                1.1.4.3.2 Vp1蛋白的鉴定第29-30页
                1.1.4.3.3 Vp1蛋白的纯化第30页
                1.1.4.3.4 Vp1蛋白的复性第30-31页
                1.1.4.3.5 Vp1蛋白的定量第31-32页
            1.1.4.4 Vp1对沙眼衣原体的作用第32-34页
                1.1.4.4.1 Vp1蛋白作用最佳浓度的确定第32页
                1.1.4.4.2 Vp1蛋白对McCoy细胞的毒性检测第32-33页
                1.1.4.4.3 Vp1蛋白对沙眼衣原体作用的光镜观察第33页
                1.1.4.4.4 Vp1蛋白对沙眼衣原体作用的免疫荧光检测第33-34页
            1.1.4.5 阿奇霉素对沙眼衣原体的作用第34-35页
                1.1.4.5.1 阿奇霉素的配制第34页
                1.1.4.5.2 阿奇霉素作用最佳浓度的确定第34-35页
                1.1.4.5.3 阿奇霉素对McCoy细胞的毒性作用检测第35页
            1.1.4.6 p‐ERK与ERK的Western blot检测第35-37页
                1.1.4.6.1 实验分组第35-36页
                1.1.4.6.2 各组p‐ERK1/2 与ERK1/2 的Western blot检测第36-37页
            1.1.4.7 ERK1(Mapk3)与ERK2(Mapk1)基因的Real Time PCR检测第37-40页
            1.1.4.8 IL‐1 与IL‐8 的Elisa检测第40-41页
    1.2 结果第41-62页
        1.2.1 沙眼衣原体的纯化与定量第41-43页
        1.2.2 Vp1蛋白的SDS‐PAGE及Western blot鉴定第43-44页
        1.2.3 Vp1蛋白的定量第44-45页
        1.2.4 Vp1蛋白对沙眼衣原体作用的光镜观察及作用最佳浓度的测定第45-47页
        1.2.5 Vp1蛋白对McCoy细胞毒性作用检测第47页
        1.2.6 Vp1蛋白对沙眼衣原体作用的免疫荧光检测第47-49页
        1.2.7 阿奇霉素对沙眼衣原体作用的光镜观察及最佳浓度的测定第49-50页
        1.2.8 阿奇霉素对McCoy细胞毒性作用检测第50-51页
        1.2.9 ERK1(Mapk3)与ERK2(Mapk1)基因的Real Time PCR检测第51-54页
        1.2.10 各分组p‐ERK及ERK的Western blot检测第54-57页
        1.2.11 IL‐1 与IL‐8 的Elisa检测第57-62页
    1.3 讨论第62-68页
        1.3.1 Vp1蛋白的表达、纯化与复性第63-64页
        1.3.2 沙眼衣原体的纯化第64-65页
        1.3.3 Vp1与阿奇霉素对沙眼衣原体作用的镜下观察第65-66页
        1.3.4 Vp1与阿奇霉素对沙眼衣原体作用的不同点第66-67页
        1.3.5 ERK1与ERK2基因在Vp1和阿奇霉素作用沙眼衣原体中的表达第67页
        1.3.6 Vp1及阿奇霉素作用于沙眼衣原体后细胞中炎症因子IL‐1 和IL‐8 的改变第67-68页
    1.4 小结第68-69页
二、衣原体噬菌体PHICPG1衣壳蛋白VP1对沙眼衣原体作用与三型分泌系统及生长周期的相关性研究第69-91页
    2.1 材料和方法第69-74页
        2.1.1 细菌、细胞、沙眼衣原体第69页
        2.1.2 试剂耗材及液体配制第69-70页
        2.1.3 仪器与耗材第70页
        2.1.4 实验方法第70-74页
            2.1.4.1 Vp1干预实验第70页
            2.1.4.2 提取样本总RNA第70-72页
            2.1.4.3 RNA电泳第72页
            2.1.4.4 RNA质量检测第72页
            2.1.4.5 逆转录合成c DNA第72-73页
            2.1.4.6 Real Time PCR第73-74页
            2.1.4.7 防止Rnase污染的措施第74页
    2.2 结果第74-86页
        2.2.1 引物合成第74-75页
        2.2.2 RNA的鉴定第75-76页
        2.2.3 各基因的Realtime PCR结果第76-86页
    2.3 讨论第86-89页
        2.3.1 沙眼衣原体的三型分泌系统第86-87页
        2.3.2 沙眼衣原体的生长周期第87-88页
        2.3.3 沙眼衣原体的持续感染第88-89页
        2.3.4 Vp1作用于沙眼衣原体可能机制的分析第89页
    2.4 小结第89-91页
全文结论第91-92页
论文创新点第92-93页
参考文献第93-101页
发表论文和参加科研情况说明第101-102页
综述一 沙眼衣原体与宿主细胞作用相关信号通路的研究进展第102-110页
    综述参考文献第107-110页
综述二 沙眼衣原体与自噬第110-116页
    综述参考文献第114-116页
致谢第116-117页
个人简历第117页

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