中文摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
缩略语/符号说明 | 第11-13页 |
前言 | 第13-22页 |
研究现状、成果 | 第13-20页 |
研究目的、方法 | 第20-22页 |
一、衣原体噬菌体PHICPG1衣壳蛋白VP1对沙眼衣原体作用MEK/ERK通路的研究 | 第22-69页 |
1.1 材料和方法 | 第22-41页 |
1.1.1 细菌、细胞、沙眼衣原体 | 第22页 |
1.1.2 试剂耗材及液体配制 | 第22-24页 |
1.1.3 仪器与耗材 | 第24页 |
1.1.4 实验方法 | 第24-41页 |
1.1.4.1 McCoy细胞的培养 | 第24-25页 |
1.1.4.1.1 McCoy细胞的复苏 | 第24-25页 |
1.1.4.1.2 McCoy细胞的传代 | 第25页 |
1.1.4.1.3 McCoy细胞的冻存 | 第25页 |
1.1.4.2 沙眼衣原体的培养 | 第25-28页 |
1.1.4.2.1 沙眼衣原体的提取 | 第25-26页 |
1.1.4.2.2 沙眼衣原体的接种 | 第26页 |
1.1.4.2.3 沙眼衣原体的收集(标准株 44‐48h,临床株 60‐72h) | 第26页 |
1.1.4.2.4 沙眼衣原体的纯化 | 第26-27页 |
1.1.4.2.5 沙眼衣原体的定量 | 第27-28页 |
1.1.4.3 Vp1的表达、鉴定与纯化 | 第28-32页 |
1.1.4.3.1 Vp1蛋白的表达 | 第28-29页 |
1.1.4.3.2 Vp1蛋白的鉴定 | 第29-30页 |
1.1.4.3.3 Vp1蛋白的纯化 | 第30页 |
1.1.4.3.4 Vp1蛋白的复性 | 第30-31页 |
1.1.4.3.5 Vp1蛋白的定量 | 第31-32页 |
1.1.4.4 Vp1对沙眼衣原体的作用 | 第32-34页 |
1.1.4.4.1 Vp1蛋白作用最佳浓度的确定 | 第32页 |
1.1.4.4.2 Vp1蛋白对McCoy细胞的毒性检测 | 第32-33页 |
1.1.4.4.3 Vp1蛋白对沙眼衣原体作用的光镜观察 | 第33页 |
1.1.4.4.4 Vp1蛋白对沙眼衣原体作用的免疫荧光检测 | 第33-34页 |
1.1.4.5 阿奇霉素对沙眼衣原体的作用 | 第34-35页 |
1.1.4.5.1 阿奇霉素的配制 | 第34页 |
1.1.4.5.2 阿奇霉素作用最佳浓度的确定 | 第34-35页 |
1.1.4.5.3 阿奇霉素对McCoy细胞的毒性作用检测 | 第35页 |
1.1.4.6 p‐ERK与ERK的Western blot检测 | 第35-37页 |
1.1.4.6.1 实验分组 | 第35-36页 |
1.1.4.6.2 各组p‐ERK1/2 与ERK1/2 的Western blot检测 | 第36-37页 |
1.1.4.7 ERK1(Mapk3)与ERK2(Mapk1)基因的Real Time PCR检测 | 第37-40页 |
1.1.4.8 IL‐1 与IL‐8 的Elisa检测 | 第40-41页 |
1.2 结果 | 第41-62页 |
1.2.1 沙眼衣原体的纯化与定量 | 第41-43页 |
1.2.2 Vp1蛋白的SDS‐PAGE及Western blot鉴定 | 第43-44页 |
1.2.3 Vp1蛋白的定量 | 第44-45页 |
1.2.4 Vp1蛋白对沙眼衣原体作用的光镜观察及作用最佳浓度的测定 | 第45-47页 |
1.2.5 Vp1蛋白对McCoy细胞毒性作用检测 | 第47页 |
1.2.6 Vp1蛋白对沙眼衣原体作用的免疫荧光检测 | 第47-49页 |
1.2.7 阿奇霉素对沙眼衣原体作用的光镜观察及最佳浓度的测定 | 第49-50页 |
1.2.8 阿奇霉素对McCoy细胞毒性作用检测 | 第50-51页 |
1.2.9 ERK1(Mapk3)与ERK2(Mapk1)基因的Real Time PCR检测 | 第51-54页 |
1.2.10 各分组p‐ERK及ERK的Western blot检测 | 第54-57页 |
1.2.11 IL‐1 与IL‐8 的Elisa检测 | 第57-62页 |
1.3 讨论 | 第62-68页 |
1.3.1 Vp1蛋白的表达、纯化与复性 | 第63-64页 |
1.3.2 沙眼衣原体的纯化 | 第64-65页 |
1.3.3 Vp1与阿奇霉素对沙眼衣原体作用的镜下观察 | 第65-66页 |
1.3.4 Vp1与阿奇霉素对沙眼衣原体作用的不同点 | 第66-67页 |
1.3.5 ERK1与ERK2基因在Vp1和阿奇霉素作用沙眼衣原体中的表达 | 第67页 |
1.3.6 Vp1及阿奇霉素作用于沙眼衣原体后细胞中炎症因子IL‐1 和IL‐8 的改变 | 第67-68页 |
1.4 小结 | 第68-69页 |
二、衣原体噬菌体PHICPG1衣壳蛋白VP1对沙眼衣原体作用与三型分泌系统及生长周期的相关性研究 | 第69-91页 |
2.1 材料和方法 | 第69-74页 |
2.1.1 细菌、细胞、沙眼衣原体 | 第69页 |
2.1.2 试剂耗材及液体配制 | 第69-70页 |
2.1.3 仪器与耗材 | 第70页 |
2.1.4 实验方法 | 第70-74页 |
2.1.4.1 Vp1干预实验 | 第70页 |
2.1.4.2 提取样本总RNA | 第70-72页 |
2.1.4.3 RNA电泳 | 第72页 |
2.1.4.4 RNA质量检测 | 第72页 |
2.1.4.5 逆转录合成c DNA | 第72-73页 |
2.1.4.6 Real Time PCR | 第73-74页 |
2.1.4.7 防止Rnase污染的措施 | 第74页 |
2.2 结果 | 第74-86页 |
2.2.1 引物合成 | 第74-75页 |
2.2.2 RNA的鉴定 | 第75-76页 |
2.2.3 各基因的Realtime PCR结果 | 第76-86页 |
2.3 讨论 | 第86-89页 |
2.3.1 沙眼衣原体的三型分泌系统 | 第86-87页 |
2.3.2 沙眼衣原体的生长周期 | 第87-88页 |
2.3.3 沙眼衣原体的持续感染 | 第88-89页 |
2.3.4 Vp1作用于沙眼衣原体可能机制的分析 | 第89页 |
2.4 小结 | 第89-91页 |
全文结论 | 第91-92页 |
论文创新点 | 第92-93页 |
参考文献 | 第93-101页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第101-102页 |
综述一 沙眼衣原体与宿主细胞作用相关信号通路的研究进展 | 第102-110页 |
综述参考文献 | 第107-110页 |
综述二 沙眼衣原体与自噬 | 第110-116页 |
综述参考文献 | 第114-116页 |
致谢 | 第116-117页 |
个人简历 | 第117页 |