| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词及英汉对照 | 第6-10页 |
| 1 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 抗菌肽概述 | 第10-14页 |
| 1.1.1 抗菌肽的来源及结构特点 | 第10-11页 |
| 1.1.2 抗菌肽的作用机理 | 第11-12页 |
| 1.1.3 抗菌肽的应用 | 第12-14页 |
| 1.1.3.1 抗菌肽食品药品应用 | 第12-13页 |
| 1.1.3.2 抗菌肽在养殖业的应用 | 第13页 |
| 1.1.3.3 在农业上的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 重组蛋白的原核表达 | 第14-17页 |
| 1.2.1 分泌表达途径 | 第14-17页 |
| 1.2.2 胞内表达 | 第17页 |
| 1.3 研究目的、意义和研究背景 | 第17-18页 |
| 2 实验材料、仪器和方法 | 第18-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 主要引物 | 第18-19页 |
| 2.2 实验仪器 | 第19页 |
| 2.3 主要试剂及配制 | 第19-21页 |
| 2.4 实验方法 | 第21-30页 |
| 2.4.1 核酸实验方法 | 第21-25页 |
| 2.4.1.1 质粒的抽提步骤（方法来自购买试剂盒） | 第21-22页 |
| 2.4.1.2 聚合酶链式反应 | 第22页 |
| 2.4.1.3 重叠区互补PCR法扩增完整的目的片段 | 第22-23页 |
| 2.4.1.4 DNA的酶切和连接 | 第23-24页 |
| 2.4.1.5 琼脂糖凝胶纯化回收DNA | 第24-25页 |
| 2.4.1.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| 2.4.2 转化相关实验 | 第25-27页 |
| 2.4.2.1 大肠杆菌热击感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2.4.2.2 热击感受态细胞的转化 | 第26页 |
| 2.4.2.3 菌落PCR检测重组子 | 第26-27页 |
| 2.4.3 蛋白实验方法 | 第27-30页 |
| 2.4.3.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第27页 |
| 2.4.3.2 Tricine-SDS-PGEA凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 2.4.3.3 蛋白的大量分泌表达 | 第28页 |
| 2.4.3.4 镍柱亲和层析纯化 | 第28-29页 |
| 2.4.3.5 蛋白透析实验 | 第29页 |
| 2.4.3.6 蛋白浓缩 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-51页 |
| 3.1 载体pET28b-sp-eYeb-RS-Metch（P-1）的构建及蛋白表达 | 第30-35页 |
| 3.1.1 载体构建 | 第30-32页 |
| 3.1.2 蛋白表达分析 | 第32-35页 |
| 3.1.2.1 诱导物浓度对目的蛋白分泌表达的影响 | 第32-33页 |
| 3.1.2.2 表达温度对目的蛋白分泌表达的影响 | 第33页 |
| 3.1.2.3 表达转速对蛋白分泌表达的影响 | 第33-34页 |
| 3.1.2.4 表达时间对目的蛋白积累的影响 | 第34-35页 |
| 3.2 不同来源的Yeb对抗菌肽Metchnikowin表达量的影响 | 第35-39页 |
| 3.2.1 构建载体pET28b-sp-s Yeb-RS-Metch（P-2） | 第35-36页 |
| 3.2.2 载体P-1和P-2蛋白表达对比 | 第36-37页 |
| 3.2.3 sp序列改造对目的蛋白分泌表达的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.4 载体P-2 与P-3 表达对比 | 第38-39页 |
| 3.3 分泌表达的Metch活性检测 | 第39-41页 |
| 3.4 表达载体P-4 的构建、蛋白表达及活性检测 | 第41-51页 |
| 3.4.1 载体构建 | 第41-42页 |
| 3.4.2 载体P-4 蛋白表达分析 | 第42-49页 |
| 3.4.2.1 表达时间对目的蛋白表达的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.2.2 诱导物浓度对目的蛋白表达的影响 | 第44-46页 |
| 3.4.2.3 表达温度对目的蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.2.4 摇床转速对目的蛋白表达的影响 | 第47-49页 |
| 3.4.3 Metchnikowin胞内表达活性检测 | 第49-51页 |
| 4 结论与讨论 | 第51-55页 |
| 4.1 结论 | 第51-52页 |
| 4.2 讨论 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
