| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 高血压疾病的危害及其现状 | 第14页 |
| 1.2 血管紧张素转化酶的概述 | 第14-15页 |
| 1.2.1 血管紧张素转化酶的生物学作用 | 第14-15页 |
| 1.2.2 血管紧张素转化酶的研究进展 | 第15页 |
| 1.3 酶的分离与纯化 | 第15-20页 |
| 1.3.1 细胞破碎 | 第16页 |
| 1.3.2 盐析 | 第16-17页 |
| 1.3.3 凝胶过滤层析 | 第17-18页 |
| 1.3.4 离子交换色谱 | 第18页 |
| 1.3.5 亲和层析法 | 第18-19页 |
| 1.3.6 其他纯化方法 | 第19-20页 |
| 1.4 血管紧张素转化酶抑制剂的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4.1 血管紧张素转化酶抑制肽研究进展 | 第20页 |
| 1.4.2 血管紧张素转化酶抑制药物的发展 | 第20-21页 |
| 1.5 微量量热技术的研究进展 | 第21-24页 |
| 1.5.1 微量量热技术的原理 | 第21-22页 |
| 1.5.2 微量量热技术在酶催化的反应的应用 | 第22页 |
| 1.5.3 微量量热技术在药物蛋白结合的应用 | 第22-23页 |
| 1.5.4 微量量热技术在生命科学研究中的展望 | 第23-24页 |
| 1.6 本课题的研究目的、意义和研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 猪肺血管紧张素转化酶的提取工艺优化与分离纯化 | 第26-43页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 试剂和仪器 | 第26-28页 |
| 2.2.1 实验试剂与材料 | 第26-27页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-33页 |
| 2.3.1 实验的分析方法 | 第28-29页 |
| 2.3.1.1 蛋白质含量测定 | 第28页 |
| 2.3.1.2 酶活测定方法 | 第28-29页 |
| 2.3.2 预处理猪肺ACE粗提匀浆液 | 第29-30页 |
| 2.3.2.1 超声波破碎结合胰蛋白酶酶解预处理粗提液 | 第29-30页 |
| 2.3.2.2 超声波辅助提取工艺条件考察 | 第30页 |
| 2.3.3 硫酸铵分级沉淀 | 第30-31页 |
| 2.3.4 猪肺ACE的DEAE-FF层析 | 第31-32页 |
| 2.3.4.1 不同洗脱盐浓度梯度下的柱层析 | 第32页 |
| 2.3.5 超滤离心 | 第32-33页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第33-41页 |
| 2.4.1 蛋白质含量的测定 | 第33页 |
| 2.4.2 马尿酸含量的测定 | 第33-34页 |
| 2.4.3 超声波破碎联合酶解最优处理方式的选取 | 第34-35页 |
| 2.4.4 超声功率对ACE粗提取的影响 | 第35-36页 |
| 2.4.5 超声时间对ACE粗提取的影响 | 第36-37页 |
| 2.4.6 浆液比对ACE粗提取的影响 | 第37页 |
| 2.4.7 ACE的硫酸铵盐析 | 第37-38页 |
| 2.4.8 DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析-超滤离心 | 第38-41页 |
| 2.4.8.1 最适洗脱盐浓度的确定 | 第38-41页 |
| 2.4.8.2 离子交换-超滤离心 | 第41页 |
| 2.5 小结 | 第41-43页 |
| 第三章 猪肺ACE的酶学性质 | 第43-54页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第43-45页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第44-45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-47页 |
| 3.3.1 蛋白含量与酶活测定 | 第45页 |
| 3.3.2 ACE分子量测定 | 第45-47页 |
| 3.3.2.1 SDS-PAGE凝胶电泳储存液配制 | 第45-47页 |
| 3.3.3 猪肺ACE酶学性质的研究 | 第47页 |
| 3.3.3.1 不同温度下的酶催化反应 | 第47页 |
| 3.3.3.2 不同pH值下的酶催化反应 | 第47页 |
| 3.3.3.3 酶催化反应动力学 | 第47页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第47-52页 |
| 3.4.1 猪肺ACE分子量测定与质谱鉴定结果 | 第47-49页 |
| 3.4.2 酶学性质的研究结果和讨论 | 第49-52页 |
| 3.4.2.1 最适反应温度 | 第49-50页 |
| 3.4.2.2 最适pH值 | 第50-51页 |
| 3.4.2.3 酶催化反应动力学常数的测定 | 第51-52页 |
| 3.5 小结 | 第52-54页 |
| 第四章 猪肺ACE与其抑制剂结合的热力学测定 | 第54-70页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第54-55页 |
| 4.2.1 材料和实验试剂 | 第54-55页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.3.1 等温滴定量热(ITC)实验 | 第55-56页 |
| 4.3.2 ITC实验原理 | 第56-57页 |
| 4.3.3 猪肺ACE与Lisinopril结合的热力学测定 | 第57页 |
| 4.3.3.1 测定Lisinopril的IC_(50)值 | 第57页 |
| 4.3.3.2 Lisinopril抑制ACE热力学过程 | 第57页 |
| 4.3.4 猪肺ACE与乳源ACEI结合的热力学测定 | 第57-58页 |
| 4.3.4.1 VSLPEW(α-乳清蛋白)的IC_(50)值测定 | 第57-58页 |
| 4.3.4.2 VSLPEW抑制ACE热力学过程 | 第58页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第58-69页 |
| 4.4.1 Lisinopril IC_(50)的结果 | 第58-59页 |
| 4.4.2 Lisinopril抑制ACE的热力学实验 | 第59-64页 |
| 4.4.3 VSLPEW IC_(50)的结果 | 第64-65页 |
| 4.4.4 乳源ACEI抑制ACE的结合过程研究 | 第65-69页 |
| 4.5 小结 | 第69-70页 |
| 第五章 结论与建议 | 第70-72页 |
| 5.1 结论 | 第70-71页 |
| 5.2 建议 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 附图1 MALDI-TOFMS质谱鉴定图 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第79页 |
