| 符号说明 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-13页 |
| 1.1 DJ-1与帕金森病 | 第9-10页 |
| 1.2 粟酒裂殖酵母中的SpDJ-1和Hsp31蛋白 | 第10页 |
| 1.3 蛋白亚细胞定位的研究 | 第10-11页 |
| 1.4 酵母氧化应激反应的研究 | 第11-12页 |
| 1.5 模式生物——粟酒裂殖酵母 | 第12-13页 |
| 第二章 SpDJ-1和Hsp31蛋白在nmt1启动子调控下亚细胞定位的研究 | 第13-29页 |
| 2.1 材料与培养基 | 第13-15页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第13-14页 |
| 2.1.2 培养基与试剂 | 第14-15页 |
| 2.2 实验方法 | 第15-23页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第15-16页 |
| 2.2.2 重组质粒pJK148-nmt1new-hsp3102-3105-gfp的构建 | 第16-21页 |
| 2.2.3 菌种P_(nmt 41)-hsp3102-3105-gfp的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.4 蛋白nmt1启动子调控下亚细胞定位的显微镜观察 | 第22-23页 |
| 2.3 实验结果 | 第23-28页 |
| 2.3.1 重组质粒pJK148-nmt1new-hsp3102-3105-gfp的构建 | 第23-26页 |
| 2.3.2 菌株P_(nmt 41)-hsp3102-3105-gfp的构建 | 第26页 |
| 2.3.3 蛋白nmt1启动子调控下亚细胞定位的显微镜观察 | 第26-28页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 SpDJ-1和Hsp31蛋白在自身启动子调控下亚细胞定位的研究 | 第29-49页 |
| 3.1 材料与培养基 | 第29-31页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第29-31页 |
| 3.1.2 培养基与试剂 | 第31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-39页 |
| 3.2.1 融合PCR方法构建SpDJ-1,hsp3101,hsp3102同源重组片段 | 第31-34页 |
| 3.2.2 克隆方法构建hsp3103,hsp3104,hsp3105同源重组片段 | 第34-37页 |
| 3.2.3 SpDJ-1和hsp31-gfp菌株的获得 | 第37-38页 |
| 3.2.4 核共定位载体pJK148-nmt1 new-trz1-rfp的构建 | 第38页 |
| 3.2.5 核共定位菌株的构建 | 第38页 |
| 3.2.6 荧光显微镜观察 | 第38-39页 |
| 3.3 实验结果 | 第39-47页 |
| 3.3.1 融合PCR方法构建SpDJ-1,hsp3101,hsp3102同源重组片段 | 第39-40页 |
| 3.3.2 克隆方法构建hsp3103,hsp3104,hsp3105同源重组片段 | 第40-44页 |
| 3.3.3 SpDJ-1和hsp31-gfp菌株的验证 | 第44-46页 |
| 3.3.4 核共定位质粒pJK148-nmtlnew-trzl-rfp的构建 | 第46页 |
| 3.3.5 核共定位菌株的显微镜观察 | 第46-47页 |
| 3.4 分析与讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 SpDJ-1和Hsp31蛋白表达水平以及SpDJ-1对胁迫反应的研究 | 第49-62页 |
| 4.1 材料与培养基 | 第49-50页 |
| 4.1.1 菌种 | 第49页 |
| 4.1.2 培养基与试剂 | 第49-50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-53页 |
| 4.2.1 目的蛋白的获得 | 第50-51页 |
| 4.2.2 目的蛋白浓度的测定 | 第51页 |
| 4.2.3 Western-Blot检测蛋白表达水平 | 第51-52页 |
| 4.2.4 菌株对H_2O_2和TBHP的敏感性点圈实验 | 第52-53页 |
| 4.2.5 菌株对温度敏感性点圈实验 | 第53页 |
| 4.3 实验结果 | 第53-60页 |
| 4.3.1 NET2缓冲液BCA法测蛋白浓度标准曲线 | 第53-54页 |
| 4.3.2 SpDJ-1,Hsp3101-3105菌株总蛋白的浓度 | 第54页 |
| 4.3.3 SpDJ-1,Hsp3101-3105蛋白的western blot分析 | 第54-55页 |
| 4.3.4 菌株WT和ΔSpDJ-1对TBHP的敏感性点圈实验 | 第55-56页 |
| 4.3.5 菌株WT和ΔSpDJ-1对H_2O_2的敏感性点圈实验 | 第56-57页 |
| 4.3.6 菌株WT和ΔSpDJ-1对温度敏感性点圈实验 | 第57-58页 |
| 4.3.7 菌株pREP3X和pREP3X-SpDJ-1对TBHP的敏感性点圈实验 | 第58-59页 |
| 4.3.8 菌株pREP3X和pREP3X-SpDJ-1对H_2O_2的敏感性点圈实验 | 第59-60页 |
| 4.4 分析与讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 全文总结 | 第62-64页 |
| References | 第64-69页 |
| 附录一 主要仪器 | 第69-70页 |
| 附录二 本实验所用的质粒 | 第70-71页 |
| 附录三 本实验所用的菌种 | 第71-72页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
