| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-30页 |
| 1. 合成生物学(Sythetic biology) | 第16-19页 |
| 1.1. 合成生物学概述 | 第16页 |
| 1.2. 合成生物学在生物医药领域进展 | 第16-17页 |
| 1.3. 合成生物学在生物能源领域的研究进展 | 第17页 |
| 1.4. 合成生物学在合成生命方面的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5. 合成生物学在微生物代谢工程中的应用 | 第18-19页 |
| 2. 血红素 | 第19-23页 |
| 2.1. 血红素的简介 | 第19-20页 |
| 2.2. 血红素的生物功能 | 第20-21页 |
| 2.3. 血红素对原核生物的重要性 | 第21-22页 |
| 2.4. 大肠杆菌中的血红素合成 | 第22-23页 |
| 3. 元件调控蛋白 | 第23-27页 |
| 3.1. IRR蛋白简介 | 第23-24页 |
| 3.2. IRR蛋白作用机理 | 第24-25页 |
| 3.3. CI蛋白 | 第25页 |
| 3.4. ssrA(tmRNA)蛋白降解标签 | 第25-27页 |
| 4. 本论文的研究内容与意义 | 第27-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-58页 |
| 1. 实验材料 | 第30-41页 |
| 1.1. 本实验所用的菌株和质粒 | 第30-32页 |
| 1.2. 本实验所用引物 | 第32-34页 |
| 1.3. 分子生物学常用酶 | 第34-35页 |
| 1.4. 常用试剂盒 | 第35页 |
| 1.5. 常用的生化试剂 | 第35-36页 |
| 1.6. 培养基的配制 | 第36-38页 |
| 1.7. 常用溶液及缓冲液的配制 | 第38-40页 |
| 1.8. 仪器和设备 | 第40-41页 |
| 2. 实验方法 | 第41-58页 |
| 2.1. 菌种、质粒、核酸片段的保藏 | 第41-42页 |
| 2.2. 分子生物学常规实验操作 | 第42-50页 |
| 2.2.1. PCR扩增 | 第42-44页 |
| 2.2.2. PCR产物回收 | 第44页 |
| 2.2.3. 质粒DNA提取 | 第44-45页 |
| 2.2.4. 大肠杆菌基因组DNA提取 | 第45页 |
| 2.2.5. 琼脂糖凝胶DNA产物的回收 | 第45页 |
| 2.2.6. 大肠杆菌化学感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| 2.2.7. 体外组装目的片段和载体 | 第46-47页 |
| 2.2.8. 大肠杆菌的常规转化(化学转化法) | 第47-48页 |
| 2.2.9. 重组子的筛选与鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2.10. 同源重组片段的克隆 | 第49-50页 |
| 2.3. 基因一步敲除法 | 第50-53页 |
| 2.3.1. 电转化感受态细胞的制备 | 第50-51页 |
| 2.3.2. 电转化同源重组片段 | 第51-52页 |
| 2.3.3. 重组子的筛选与鉴定 | 第52页 |
| 2.3.4. 质粒pTKRED的去除 | 第52页 |
| 2.3.5. 去除大肠杆菌菌株中基因组上氯霉素抗性基因 | 第52-53页 |
| 2.4. 质粒与菌株的构建 | 第53-55页 |
| 2.4.1. 质粒PGFPⅠ、PGFPⅡ的构建 | 第53-54页 |
| 2.4.2. 质粒PGFPⅢ、PGFPⅣ的构建 | 第54页 |
| 2.4.3. 质粒pGFPⅢ2、pGFPⅣ2 | 第54页 |
| 2.4.4. 质粒pGFPV的构建 | 第54-55页 |
| 2.5. 发酵方法 | 第55-58页 |
| 2.5.1. 种子培养 | 第55页 |
| 2.5.2. 摇瓶发酵 | 第55页 |
| 2.5.3. 菌体生长情况和荧光的检测 | 第55-58页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第58-74页 |
| 1. 启动子功能的验证 | 第58-61页 |
| 2. 单元件功能的验证 | 第61-68页 |
| 3. 质粒pGFPV的构建及发酵 | 第68-70页 |
| 4. 构建调控元件对血红素的感应 | 第70-71页 |
| 5. 亚铁离子浓度对调控元件的影响 | 第71-74页 |
| 全文总结 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第84-85页 |
| 附件 | 第85页 |