中文摘要 | 第8-11页 |
英文摘要 | 第11-13页 |
1 前言 | 第14-35页 |
1.1 PRRSV的基因组结构 | 第15页 |
1.2 PRRSV的非结构蛋白及其功能 | 第15-26页 |
1.2.1 动脉炎的NSP1:具有自切割活性参与不同阶段的复制周期 | 第16-20页 |
1.2.2 非结构蛋白NSP2 | 第20-21页 |
1.2.3 主要蛋白酶NSP4 | 第21-22页 |
1.2.4 动脉炎病毒RNA合成中的关键酶:RdRp蛋NSP9和解旋酶NSP10 | 第22页 |
1.2.5 核糖核酸内切酶NSP11:在动脉炎病毒中发现的一个潜在的“自杀酶” | 第22-23页 |
1.2.6 与非结构蛋白相关的特殊结构和功能 | 第23-25页 |
1.2.7 其他非结构蛋白及功能 | 第25-26页 |
1.3 结构蛋白及其功能 | 第26-31页 |
1.3.1 主要结构蛋白 | 第27-28页 |
1.3.2 次要结构蛋白 | 第28-30页 |
1.3.3 与结构蛋白相关的病毒侵入 | 第30-31页 |
1.4 PRRSV亟待解决的争议 | 第31-34页 |
1.4.1 PRRSV免疫逃逸机制 | 第31页 |
1.4.2 抗体依赖性增强(ADE) | 第31-32页 |
1.4.3 持续感染 | 第32页 |
1.4.4 中和抗体 | 第32-33页 |
1.4.5 毒力基因 | 第33页 |
1.4.6 存储和复制的组织 | 第33-34页 |
1.5 本研究的目的与意义 | 第34-35页 |
2 材料与方法 | 第35-49页 |
2.1 材料 | 第35-36页 |
2.1.1 主要试剂 | 第35页 |
2.1.2 主要仪器设备 | 第35页 |
2.1.3 细胞、毒株、质粒和菌株 | 第35-36页 |
2.1.4 实验动物 | 第36页 |
2.2 方法 | 第36-49页 |
2.2.1 影响疫苗株对PAM感染效率的关键ORF的确定 | 第36-38页 |
2.2.2 关键基因区域的确定 | 第38-43页 |
2.2.3 重组NSP2基因的嵌合病毒的构建及拯救 | 第43-45页 |
2.2.4 NSP2蛋白上关键氨基酸的鉴定 | 第45-46页 |
2.2.5 NSP2作用机理的探索 | 第46-47页 |
2.2.6 HP-PRRSV疫苗株体内储存器官的确定 | 第47-49页 |
3 结果 | 第49-69页 |
3.1 影响病毒感染PAM效率的关键ORF的鉴定 | 第49-50页 |
3.1.1 病毒拷贝密度的检测 | 第49页 |
3.1.2 流式细胞术检测结果 | 第49-50页 |
3.2 关键基因区域的确定 | 第50-55页 |
3.2.1 嵌合病毒的拯救及鉴定 | 第50-53页 |
3.2.2 嵌合病毒毒价测定 | 第53页 |
3.2.3 病毒生长曲线的测定 | 第53-54页 |
3.2.4 各基因替换后对病毒感染PAM效率的影响 | 第54-55页 |
3.3 关键基因NSP2的确定 | 第55-57页 |
3.3.1 互换NSP2基因的感染性克隆构建及拯救 | 第55-57页 |
3.3.2 结果判定 | 第57页 |
3.4 关键基因作用机理的揭示 | 第57-60页 |
3.4.1 病毒接种量的确定 | 第57-58页 |
3.4.2 疫苗株侵入宿主和RNA合成的能力的影响 | 第58-59页 |
3.4.3 关键基因对病毒蛋白合成的影响 | 第59-60页 |
3.5 关键氨基酸的确定 | 第60-61页 |
3.6 PRRSV在猪体内分布器官的鉴定 | 第61-69页 |
3.6.1 血清病毒分离结果 | 第62页 |
3.6.2 剖检结果 | 第62页 |
3.6.3 各组织细胞被感染的比例分析 | 第62-69页 |
4 讨论 | 第69-75页 |
4.1 关键基因鉴定的意义 | 第69-71页 |
4.2 关键基因NSP2的功能 | 第71-72页 |
4.3 鉴定PRRSV在体内分布的意义 | 第72-75页 |
5 结论 | 第75-76页 |
致谢 | 第76-77页 |
参考文献 | 第77-93页 |
攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第93页 |