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HP-PRRSV疫苗株HuN4-F112感染PAM效率降低的分子机理的研究

中文摘要第8-11页
英文摘要第11-13页
1 前言第14-35页
    1.1 PRRSV的基因组结构第15页
    1.2 PRRSV的非结构蛋白及其功能第15-26页
        1.2.1 动脉炎的NSP1:具有自切割活性参与不同阶段的复制周期第16-20页
        1.2.2 非结构蛋白NSP2第20-21页
        1.2.3 主要蛋白酶NSP4第21-22页
        1.2.4 动脉炎病毒RNA合成中的关键酶:RdRp蛋NSP9和解旋酶NSP10第22页
        1.2.5 核糖核酸内切酶NSP11:在动脉炎病毒中发现的一个潜在的“自杀酶”第22-23页
        1.2.6 与非结构蛋白相关的特殊结构和功能第23-25页
        1.2.7 其他非结构蛋白及功能第25-26页
    1.3 结构蛋白及其功能第26-31页
        1.3.1 主要结构蛋白第27-28页
        1.3.2 次要结构蛋白第28-30页
        1.3.3 与结构蛋白相关的病毒侵入第30-31页
    1.4 PRRSV亟待解决的争议第31-34页
        1.4.1 PRRSV免疫逃逸机制第31页
        1.4.2 抗体依赖性增强(ADE)第31-32页
        1.4.3 持续感染第32页
        1.4.4 中和抗体第32-33页
        1.4.5 毒力基因第33页
        1.4.6 存储和复制的组织第33-34页
    1.5 本研究的目的与意义第34-35页
2 材料与方法第35-49页
    2.1 材料第35-36页
        2.1.1 主要试剂第35页
        2.1.2 主要仪器设备第35页
        2.1.3 细胞、毒株、质粒和菌株第35-36页
        2.1.4 实验动物第36页
    2.2 方法第36-49页
        2.2.1 影响疫苗株对PAM感染效率的关键ORF的确定第36-38页
        2.2.2 关键基因区域的确定第38-43页
        2.2.3 重组NSP2基因的嵌合病毒的构建及拯救第43-45页
        2.2.4 NSP2蛋白上关键氨基酸的鉴定第45-46页
        2.2.5 NSP2作用机理的探索第46-47页
        2.2.6 HP-PRRSV疫苗株体内储存器官的确定第47-49页
3 结果第49-69页
    3.1 影响病毒感染PAM效率的关键ORF的鉴定第49-50页
        3.1.1 病毒拷贝密度的检测第49页
        3.1.2 流式细胞术检测结果第49-50页
    3.2 关键基因区域的确定第50-55页
        3.2.1 嵌合病毒的拯救及鉴定第50-53页
        3.2.2 嵌合病毒毒价测定第53页
        3.2.3 病毒生长曲线的测定第53-54页
        3.2.4 各基因替换后对病毒感染PAM效率的影响第54-55页
    3.3 关键基因NSP2的确定第55-57页
        3.3.1 互换NSP2基因的感染性克隆构建及拯救第55-57页
        3.3.2 结果判定第57页
    3.4 关键基因作用机理的揭示第57-60页
        3.4.1 病毒接种量的确定第57-58页
        3.4.2 疫苗株侵入宿主和RNA合成的能力的影响第58-59页
        3.4.3 关键基因对病毒蛋白合成的影响第59-60页
    3.5 关键氨基酸的确定第60-61页
    3.6 PRRSV在猪体内分布器官的鉴定第61-69页
        3.6.1 血清病毒分离结果第62页
        3.6.2 剖检结果第62页
        3.6.3 各组织细胞被感染的比例分析第62-69页
4 讨论第69-75页
    4.1 关键基因鉴定的意义第69-71页
    4.2 关键基因NSP2的功能第71-72页
    4.3 鉴定PRRSV在体内分布的意义第72-75页
5 结论第75-76页
致谢第76-77页
参考文献第77-93页
攻读博士学位期间发表的学术论文第93页

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